芘降解菌的分离纯化及其降解性能测定.pdfVIP

第29卷 第 2期 华 侨 大 学 学 报 (自然 科 学 版 ) Vo1．29 No．2 2008年4月 Journal of Huaqiao University(Natural Science) Apr．2008 文章编号： 1000—5013(2008l02—0267—03 芘降解菌的分离纯化及其降解性能测定 刘艳锋，周作明，李小林，荆国华，方柏山 (华侨大学材料科学与工程学院，福建泉州 362021) 摘要： 通过对某炼油厂生化反应池的活性污泥的富集与驯化，得到一组能以芘为唯一碳源的混合微生物 DP．将混和菌DP分离纯化，可得到6种芘降解菌 DP1，DP2，DP3，DP4，DP5和DP6．通过显微镜观察各降解 菌的菌落特征及革兰氏染色实验，初步判断DP1为细菌，其他为放线菌．在芘质量浓度为 100 mg·L-1的培 养基中培养44 h后，6种菌对芘的降解率分别为46．2 ，83．2 ，23．6 ，11．3 ，53．3 ，13．6 ，其中DP2 为芘的高效降解茵． 关键词： 芘；降解菌；分离；纯化；生物降解 中图分类号： X 172；TQ 241．5 文献标识码： A 多环芳烃(PAHs)是一类广泛存在于环境中的难降解有机污染物．在一定范围内，PAHs的遗传毒 性和致癌性随着苯环数目的增加而增加，在4～5个环时其毒性最高 ]．芘是具有4个苯环的稠环芳烃， 被确立为检测PAHs污染的指示物，其代谢物醌(Quinone)比芘毒性更大，且具有致突变性口]．研究表 明，土壤／沉积物和水环境中绝大部分PAHs是通过生物降解途径慢慢消失的，因此PAHs的生物降解 受到广泛关注口 ]．本文以芘为唯一碳源，对取自某炼油厂生化反应池的活性污泥进行富集与驯化，筛选 得到能高效降解芘的菌株，并进一步研究其对芘的降解性能． 1 材料与方法 1．1 培养基 (1)LB培养基：10 g胰蛋白胨，5 g酵母提取物，10 gNaC1，加去离子水定容至1 L，pH值为7．0，在 121℃的条件下高压湿热灭菌20 min．(2)无机培养基(MSM)：1．0 g·L (NH ) SO ，0．8 g·L Na2HPO4，0．2 g·L一 KH2PO4，0．2 g·L一 MgSO4·H2O，0．1 g·L一 CaC12·2H2O，5．0 mg·L一 FeC13·6H2O，1．0 mg·L (NH4)6MoO24·4H2O，pH一7．2，在121℃的条件下灭菌15 min． 1．2 试剂与仪器 芘(质量分数为98％，德国Sigma公司)，二氯甲烷(色谱纯)，其他化学试剂均为分析纯．H一2050R 型高速冷冻离心机(湖南长沙湘仪离心机仪器有限公司)，UV一4802H型紫外可见分光光度计(上海尤尼 科公司)，1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，CH20BIMF200型显微镜(日本奥林巴斯公司)． 1．3 实验方法 1．3．1 高效液相色谱(HPLC) 测定条件：色谱柱为ODS—C。 柱(HypersiL ODS 25 m，4．6 mm× 250 mm，辽宁大连依利特分析仪器有限公司)；流动相为体积分数为80％的甲醇和20％的超纯水，使用 前过0．22 m有机膜，并超声 15 min；流速0．8 mL·min_。，波长239 nm，温度30℃，进样量20 L． 1．3．2 降解茵的驯化与分离 菌种取自某炼油厂生化反应池，以芘为唯一碳源，逐步提高芘的质量浓 度进行驯化．摇床温度为25℃、转速为150 r·min_。，无光照培养．待培养基浑浊后，转接于新鲜培养 基中，驯化期间每24 h测定培养液的光密度值(D)．富集4次后，当芘的质量浓度达到400 mg·L 后， 收稿日期： 2007—12一O6 作者简介： 刘艳锋(1980一)，女；通讯作者：方柏山(1957一)，男，教授，博士生导师，主要从事微生物生化的研究 ．E’ mail：fangbs@hqu．edu．cn． 基金项目： 福建省自然科学基金资助项目(I)0710019)；国务院侨办科研基金资助项目(o6QZRo9) 268 华 侨 大 学 学 报 (自然 科 学 版) 即使再提高芘质量浓度浓度，微生物也不再生长．将培养所得的混合菌命名为DP，在400 mg·L_