小鼠肝脏自然杀伤细胞分离纯化及受体表达分析.pdfVIP

中西医结合肝病杂志2008年第 l8卷第5期 · 277 · · 基础理论研 究 · 小鼠肝脏 自然杀伤细胞分离纯化及受体表达分析 邹 勇。 陈 韬 严伟明’ 王洪武 ‘宋 戈’ 肖 非 ‘罗小平 宁 琴。△ 1．华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科 、感染性疾病研究所 (湖北 武汉，430030) 2．华中科技人学同济医学院附属同济医院儿科 摘 要 目的：建立一种有效分离纯化小鼠肝脏 自然杀伤细胞 (NK细胞)的方法，并对其表面几种 NK细胞受 体 (NKP46、NKG2D、NKG2A／C／E和Ly49A／C／I)的表达进行分析。方法：首先利用Pereoll不连续密度梯度离心分 离小鼠肝脏淋巴细胞，进一步经CD5(Ly—1)磁珠阳性分选清除CD3DX5 T细胞，最后利用CD49b (DX5)磁珠阳 性分选肝脏NK (CD3一DX5 )细胞。分离后的细胞经台盼蓝染色检测细胞存活率，流式细胞术检测肝脏 NK细胞纯 度及几种NK细胞受体的表达百分率 结果：不连续密度梯度离心能有效分离出肝脏淋 巴细胞，CD5 (Ly—1)磁珠清 除CD3DX5T细胞后 再用CIM9b (DX5)磁珠阳性 分选 出肝脏 NK (CD3一DX5 )细胞，纯度 可达到 (94．84- 1．0)％，存活率为92％ ～95％。NK细胞受体NKP46、NKG2D、NKG2A／C／E和 Ly49A／C／I在小鼠肝脏 NK细胞上的 表达百分率分别为 (97．9±0．7)％、 (93．2±1．7)％、 (57．2±0．9)％和 (63．34-1．9)％。结论：成功建立了一种有 效分离纯化小鼠肝脏NK细胞的方法，掌握了正常小鼠肝脏NK细胞上几种重要受体的表达情况，为进一步在病毒性 肝炎小鼠模型中进行肝脏NK细胞功能学研究及受体基因芯片分析奠定了基础 关键词 自然杀伤细胞；受体；密度梯度离心；免疫磁珠分选 Isolationandpurification ofmurinehepaticNK cellsandanalyseoftheex- pression0fNK cellreceptors ZOU Yong’ CHEN 0。 YAN Wei—ming。 ， ， ， eta1．1．DepartmentofInfectiousDisease，InstituteofInfectiousDie,ease，Tongii HospitalofTongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceamlTechm)logy (WuhanHubei，430030)China Abstract Objective：Toestalfishaefficientmethodofrisolatingandpurifyingthemurinehepatic：naturalkillercells (NK)andttJanalyzetheexpressionofseveralNK receptorsincludingNKP46，NKG2D，NKG2A／C／E andLy49A／C／ I．Methods：Murinehepaticlymphocyteswerefirstseparatedbypereolldiscontinuedensitygradienteentrifugation．CD3 DX5 T cellswerethendeletedbyapositivesortingwithCO5magneticmicrobeads．Atlast，hepaticNKcells(CD3一DX5 )wereposi— tivelysortedbyDX5 (anti—CD49b)magneticmicrobeads．Thepurityandthecellsurvivalrateofthesortedcellsweremeasured byflowcytometryandtrypanbluedyeing，respectively．TheexpressionofseveralNKcellsreceptorsOI1hepaticNK cellswerean— alyzedbyflowcytometry．Results：Th