第三十章其它病毒.pptVIP

三、微生物检验 (一)标本直接检查 1．抗原检查 (1)免疫荧光技术：取病人唾液、尿沉 渣、角膜印片及皮肤切片(含毛束)， 用荧光抗体染色检查狂犬病病毒抗 原。此法快速、敏感、特异性高。 (2)快速免疫酶联技术 取病人的脑组织、脑脊液、唾液腺、 唾液等标本检测狂犬病病毒核蛋白。 定量法是指标本光密度≥阴性对照 值+0．08为阳性。定性法为肉眼观 察阴性对照无色，检测标本出现黄 色为阳性。此法快速、敏感，阳性 率与荧光抗体检测法相近。 2．核酸检查 运用RT-PCR法检测标本中狂犬病病 毒RNA。此法敏感、快速，特异性高。 有条件的实验室可推广应用。 3.分离培养 取病人唾液、脑脊液或死后脑组 织接种动物，分离病毒，经中和试验 鉴定可确诊。但该法时间长，阳性率 低。 4.抗体检测 检测抗体可采用中和试验、补体结合试 验、血凝抑制试验、快速免疫荧光试验、 酶联免疫吸附试验等。国内多采用酶联 免疫吸附试验进行检测。将待检血清以 1：50稀释，其OD值达阴性对照OD值3倍 以上，即P／N ≥ 3为阳性。此法多用 于流行病学调查，也可用于确诊。但 感染者抗体在临床症状出现后才能测出。 5.捕捉动物观察 人被犬或其它动物咬伤后，检查动 物是否患有狂犬病，对采取防治措 施极为重要。一般不宜立即杀死， 应隔离观察710天，如不发病，则没 有患狂犬病。如发病，应取脑海马 回组织切片查内基氏小体。 三、微生物检验 1．核酸分析 原位滤膜杂交或点杂交。从细胞样 品中提取DNA，变性后用打点法吸附在 滤膜上，用同位素、酶或生物素标记 的特异性探针与滤膜上的病毒DNA杂交 后，用放射自显影或显色法检测杂交信 号。此法可检测到50个基因拷贝。 2.原位杂交 适用于经甲醛溶液固定过的组织 标本，每个细胞中含10-15个病毒 基因拷贝方可检测到。一般使用 共有序列或特异性探针。 3．DNA印迹 细胞DNA经限制性内切酶消化后，电泳分 离，变性，转移至尼龙膜上，在严谨条 件下与已知型别的标记病毒探针进行杂 交。一般在非严谨条件下，检测一个HPV 拷贝需10— 100个细胞。该法是最为可靠 的诊断方法。 4．聚合酶链式反应(PCR) 采用直接酶标引物扩增特异性DNA序 列，用探针杂交法检测扩增产物。 该法需样品少、速度快、特异性高。 第三节 细小病毒B19 与儿童镰刀细胞性贫血所致的造血障 碍、流行性红斑病、胎儿畸形及免疫 抑制病人的慢性感染、关节炎等有关。 呈小球形、无包膜的正或负链单链DNA 分子、直径约为26nm，有VP1及VP2两 种衣壳蛋白，后者壳总蛋白量的95％ 左右。 微生物检验 检测病毒是诊断再生障碍性贫血的有效指 标。在病毒循环及排出结束后的数天，病 人出现红疹及关节痛，此时是检测细小病 毒B19IgM抗体最佳时间。可用ELISA测定。 以病毒基因中 2420～3091位核苷酸(1.4kb) 表达的融合蛋白为抗原，检测IgG及IgM抗 体，也用合成的VP2检测抗体。 检测病毒可用电子显微镜、对流免疫 电泳、RIA或EIA及核酸杂交等方法； 也可用原位杂交、PCR等技术检测组 织中的细小病毒B19的DNA。