青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用 - 水生生物学报.pdf

第 41 卷 第 4 期 水 生 生 物 学 报 Vol. 41, No. 4 2 0 1 7 年 7 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA J u l . , 2 0 1 7 doi: 10.7541/2017.93 青鳉prdm 14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用 李玲玉 方 健 于 淼 陈天圣 (华中农业大学水产学院, 农业部淡水生物繁育重点实验室, 武汉 430070) 摘要: 青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类, 为探究prdm 14同源基因的潜在作 用, 实验将青鳉prmd 14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先, 将prdm 14基因的部分编码区连接 到pET32a 质粒中, 构建重组表达载体pET32a-prdm14∆600 。随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3), 经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)诱导表达, 获得分子量为 60 kD 的Prdm14重组蛋白。接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化, 免疫家兔(Oryctolagus cuniculus), 6周后获得 阳性抗体, 最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性。结果显示, 在37℃、0.6 mmol/L IPTG、 诱导3h 的条件下, 可获得Prdm14重组蛋白的高效表达; 制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青 鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在HepG2细胞中过表达的青鳉Prdm14: EGFP融合蛋白。综上所述, 研究首 次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14 的多克隆抗体, 该抗体的获得为后续研究prdm 14基因在鱼类多能性干 细胞中的作用提供了有力工具。 关键词: 青鳉; Prdm14; 原核表达; 多克隆抗体; 干细胞 中图分类号: Q786 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207(2017)04-0748-07 [9] 细胞的多能性调控和分化的分子机制是干细 至关重要的影响 , 实验表明prdm 14缺失小鼠雌性 胞生物学领域的一个重要问题。研究表明 和雄性均不育[10, 11] 。PRDM 14也是一个重要的原癌 PRDM家族成员参与了细胞早期的分化, 它们能通 基因, 在许多癌细胞中高度表达, 能促进肿瘤细胞 过组蛋白酶的激活或者相互作用来调控目的基因 的生长并降低其对化疗药物的敏感性[