生物质谱技术的发展一.ppt

串联质谱在蛋白质组学中的应用 测序其它方法 先用几种不同的蛋白水解酶对蛋白质进行酶解， 胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 嗜热菌蛋白酶( thermo lysin) SV8 酶( staphylococcusaureusV8) 各种酶解片段用HPLC 等分离得到的纯肽或简单的混合肽， 可用MS/MS 测定其各组分的顺序，然后从不同蛋白水解酶酶解片段顺序，找到其重叠部分，即可得到整个蛋白质顺序。 蛋白质的翻译后修饰鉴定 磷酸化修饰 糖基化修饰 巯基和二硫键定位 氨基的乙酰化 泛素化修饰 磷酸化修饰 已知的磷酰氨基酸的类型有四种： 1．O-磷酸盐，通过羟氨酸的磷酸化形成的，如丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸。 2．N-磷酸盐，通过精氨酸，赖氨酸或组氨酸中的氨基的磷酸化形成的。 3．乙酰磷酸盐，通过天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成的。 4．S-磷酸酯，通过半胱氨酸的磷酸化形成的。 磷酸化肽富集 分离技术有：双向磷酸多肽谱图(2D-PP)；高分辨率的凝胶电泳(2DE)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)。 对于32P标记的磷酸化肽或蛋白可用放射自显影或磷储屏检测，提取后可以高灵敏度MALDI-MS分析；如果32P标记不可行，就要用LC-MS/MS分析，常用HPLC与质谱联用。 常用的富集方法有：固定金属亲和色谱(IMAC) ；抗体免疫沉淀；化学修饰 。