光谱法研究炎琥宁与牛血清白蛋白的相互作用 - 世界科学技术——中 .pdf

世界科学技术—中医药现代化★探索 光谱法研究炎琥宁与牛血清白蛋白的相互作用＊ ＊＊ 　 刘 里 ，杨晓丽，成飞翔 　 　 （曲靖师范学院化学化工学院 曲靖 655011） 摘　要 ：目的：研究炎琥宁（YHN ）与牛血清白蛋白（BSA ）之间的相互作用，为后续琥宁类药物的研 发和进一步探讨炎琥宁在生物体内与蛋白质的作用机制提供理论依据。方法：在优化的实验条件下，运 用荧光猝灭光谱法、紫外光谱法和同步荧光光谱研究炎琥宁与BSA 的相互作用。283.15 K 、298.15 K 和 313.15 K 温度下，根据 S-V 方程计算出猝灭常数（KSV ）和速率常数（Kq ）；根据L-B 双倒数方程计算出静 态猝灭结合常数（K ）；根据双对数方程计算出结合常数（K ）和结合位点数（n ）；根据热力学公式计算出 LB b 焓变（ΔH ）、熵变（ΔS ）和吉布斯自由能变（ΔG ）；根据Hill 方程计算出 Hill 系数（nH ）。结果：3 个温度 下的BSA 荧光强度随着炎琥宁浓度升高，有规律地降低；K 、Kq 、K 、K 、n 和n 值随着温度升高而降低； SV LB b H ΔG0 ，ΔH0 ，ΔS0 ；n 约等于1；nH 大于 1。结论：炎琥宁与BSA 形成基态复合物从而猝灭BSA 的内源 性荧光，猝灭机理为静态猝灭。通过计算反应热力学参数值，可推断炎琥宁与BSA 作用力主要为氢键和范 德华力。炎琥宁与BSA 可形成一个结合位点，表明炎琥宁与BSA 之间具有一定的结合作用，炎琥宁在体内 可被蛋白质储存和转运。生成自由能变ΔG 为负值，表明炎琥宁与BSA 的作用过程是一个自发过程。nH 大于 1，表明炎琥宁有正协同作用。两者的结合部位主要位于亚螺旋域ⅡA 中。同步荧光光谱表明炎琥宁 对BSA 构象产生一定的影响，使BSA 腔内疏水环境的极性减弱，结合位点更接近于酪氨酸。 关键词 ：炎琥宁　牛血清白蛋白　荧光猝灭　相互作用 doi:10.11842/wst.2015.05.037　　中图分类号：R285.5　　文献标识码：A 血清白蛋白是一种重要的运输性蛋白，在生物 脱氢穿心莲内酯 -3,19- 二琥珀酸半酯钾钠盐。它 体内的循环系统中含量非常丰富，几乎占血清蛋白 具有解热、消炎、杀菌、抗病毒、促进肾上腺皮质功 的 60%[1-3] 。近年来采用光谱研究药物与血清白蛋 能及镇静等多重功效[6] ，因其高效、低毒的特点，广 白的相互作用已成为生命科学、化学、药学和临床医 泛用于病毒性和呼吸道、胃肠道、泌尿和五官科等 学领域的研究热点，这对于了解生命过程、药物作用 感染的治疗。因此，研究 YHN 与 BSA 的相互作用 机制及药物分子设计等都具有重要作用[3-5] 。因结构 对理解药物的作用机制具有重要意义。以往研究药 上和人血清白蛋白的相似性，牛血清白蛋白（简称： 物与 BSA 相互作用主要集中在猝灭机理探讨上，而 BSA）被 广 泛 地 运 用 于 与 药 物 结 合 作 用 的 研 究[3] 。 本文在优化实验条件的情况下从更多角度研究了 炎琥宁（简称：YHN）是从爵床科植物穿心莲中提取 YHN 与 BSA 的结合反应，除了常规的作用机理的 制成的中药制剂，化学名称是 14- 脱羟 -11,12- 二 研究，还深入探讨了不同温度下两者的结合位点、 结合力类型、结合部位、药物之间的协同性等。 　　　收稿日期：2014-11-