油菜mkk2 基因原核表达及特性分析 - 兰州大学.pdf

第51 卷 第3 期 兰 州 大 学学报 （自然科学版） Vol. 51 No. 3 2015 年6 月 Journal of Lanzhou University (Natural Sciences) Jun. 2015 文章编号: 0455-2059(2015)03-0405-06 油菜MKK 2 基因原核表达及特性分析 1 1 1 1 1 2 腾国 , 郭艳峰 , 王圆圆 , 寇明刚 , 王 娟 , 孙万仓 1. 西北师 范 大 学生 命科学学院, 兰州 730070 2. 甘肃 农业大 学农学院, 兰州 730070 摘 要: MAP 激酶级联 途径 在信 号 导过程 中发 挥着 重要作 用. 以 白菜 型冬油菜“ 陇油6 号” 为材 料, 利 用 RT-PCR 法克隆到 全长MKK 2 基 因cDNA, 生 物信 息学分 析 表明油菜 MKK2 蛋白为亲 水蛋白, 包 含 有 MAPKK 蛋白所 特有 的磷 酸化 基 序 S/T-X3−5-S/T. 将 其与 大 肠 杆 菌 表达载体 pET30a 连接, 构 建 原 核 表达载体 pET30a-MKK2, 并 转化 大 肠 杆 菌 BL21, 经IPTG 诱导表达后, SDS以及 Western blotting 检 测结果 表明该基 因表达了 1 个 约43 kD 的蛋白. 实时荧 光定量PCR 结果 显示该基 因表达没有 组织特异性, 其转录 受 UV-B 胁迫的诱导. 关键词: 陇油6 号 ; MKK 2 基 因; 原核 表达; UV-B 胁迫 中图分类号: Q946 文献标识码: A doi: 10.13885/j.issn.0455-2059.2015.03.015 Prokaryotic expression and characterization of MKK 2 gene from Brassica campestris L. 1 1 1 1 1 Zhang Teng-guo , Guo Yan-feng , Wang Yuan-yuan , Kou Ming-gang , Wang Juan , Sun Wan-cang 2 1. School of Life Sciences, Northwest Normal University, Lanzhou 730070, China 2. College of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China Abstract: MAP kinase cascade pathway plays an important role in the signal transduction process. MKK 2 cDNA was cloned by RT-PCR from winter turnip rape (Brassica campestris L.) cultivar Longyou 6. Bioinformatic analysis showed that MKK2 protein is a hydrophilic protein, containing unique MAPKK protein phosphorylation motif S/T- X3−5-S/T. MKK 2 cDNA was cloned into a pET30a vector to construct the recombinant prokaryotic expression vector pET30a-MKK2. The pET30a-MKK2 was transformed to E. coli strain of BL21. After being induced by IPTG, a 43 kD recombinant