拟穴青蟹抗菌肽hyastatin 基因原核表达条件的优化.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 7 :138-142 拟穴青蟹抗菌肽 hyastatin 基因原核表达条件的优化 1，2 1，2，3，4 1，2 1，2 1，2 彭银辉   蔡小辉   熊向英   刘旭佳   黄国强 （1. 广西海洋生物技术重点实验室，北海 536000 ；2. 广西海洋研究所，北海 536000 ；3. 广东海洋大学海洋学院，湛江 524088 ； 4. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，湛江 524088） 摘 要 ： 旨在优化拟穴青蟹抗菌肽hyastatin 基因原核表达条件。克隆拟穴青蟹抗菌肽hyastatin 基因成熟肽片段，与pET- 28a 表达载体连接后，转入到大肠杆菌BL21（DE3） 中，通过优化条件进行诱导表达。结果显示，在异丙基-β-D- 硫代半乳糖苷 （IPTG）浓度0.2 mmol/L、37℃条件下培养4 h 后表达量最大，分子大小与预期值相符。融合蛋白主要以包涵体形式高效表达，通 过HisTrap HP 柱子使其得到进一步纯化。Western blot 分析表明，该融合蛋白可与鼠抗His-tag 单克隆抗体发生特异性结合。说明 通过优化表达条件，获得拟穴青蟹抗菌肽hyastatin 基因原核表达表达产物。 关键词 ： 拟穴青蟹 ；hyastatin 基因 ；原核表达 ；条件优化 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.07.020 Optimization of Prokaryotic Expression of Antibacterial Peptide hyastatin Gene in Scylla paramamosain Peng Yinhui1，2 Cai Xiaohui1，2，3，4 Xiong Xiangying1，2 Liu Xujia1，2 Huang Guoqiang1，2 （1. Guangxi Key Laboratory of Marine Biotechnology ，Beihai 536000 ；2. Guangxi Institute of Oceanology ，Beihai 536000 ：3. Marine College ，Guangdong Ocean University ，Zhanjiang 524088 ：4. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals ，Zhanjiang 524088 ） Abstract: This study aims to optimize the prokaryotic expression of hyastatin gene in Scylla paramamosain. The fragment of cloned mature peptide in was ligated with the expression vector pET-28a. This recombinant was transformed into S. paramamosain hyastatin