同济大学研究生学位论文写作规范 - 同济大学医学院.doc

博士学位论文 A dissertation submitted to Tongji University in conformity with the requirements for the degree of Doctor of Philosophy May, 2010  症状性静脉血栓栓塞症患者与T细胞免疫功能 宋浩明 同济大学 学位论文版权使用授权书 本人完全了解同济大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，同意如下各项内容：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并采用影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文；学校有权提供目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务；学校有权按有关规定向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版；在不以赢利为目的的前提下，学校可以适当复制论文的部分或全部内容用于学术活动。 学位论文作者签名： 年 月 日  同济大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 年 月 日摘要 背景 症状性静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism， VTE)是临床常见病，多发病，VTE分为肺动脉血栓栓塞症(pulmonary thromboembolism， PTE，以下简称PE)和深静脉血栓形成(deep venous thrombosis， DVT)，PE和DVT是同一疾病的两个不同阶段。慢性栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolic pulmonary hypertension， CTEPH)被认为是PE的迁延阶段，呈进行性发展，预后差。一个多世纪前，Virchow提出了血栓发生的三要素学说，血流淤滞，高凝状态和血管壁损伤。三要素学说一直作为动脉血栓和静脉血栓形成的理论基础。然而，越来越多的临床研究表明，三要素学说难以解释VTE的临床现象，特别是VTE危险因素的作用尚不能解释临床上的困惑。T细胞免疫属获得性免疫，在VTE疾病的发生发展中的作用未得到充分的认识。 目的 应用全人类基因组表达谱芯片技术研究VTE组患者和对照组患者T细胞免疫相关基因信使RNAMessage RNA，mRNA）的表达差异，同时从细胞水平研究两组患者的T细胞表面分化抗原变化，并分析T细胞免疫功能在VTE发病中的作用。 方法 收集20例VTE患者和性别、年龄基本匹配的20例对照组的新鲜静脉血样，抽提、纯化血样总核糖核酸Ribonucleic acid，RNA）分别合成Cy3标记的20例VTE患者和20例对照者的互补RNAComplementary，RNA，cRNA）探针，并分别与44K Agilent全人类基因组寡核苷酸Oligonucleotides，oligo）芯片杂交，杂交后进行图像扫描和数据分析，通过两类样本比较随机方差参数T检验，得到两组间T细胞免疫相关基因mRNA的差异表达信息。并采用FQ-PCR对部分基因的芯片检测结果进行反检测以验证基因芯片的可靠性。同时临床上选取明确诊断的39例VTE患者（PE23例、DVT7例、CTEPH9例）为临床VTE组，另选36例年龄、性别与之匹配的非VTE患者为临床对照组，随后分别通过流式细胞仪检测两组患者的T细胞表面分化抗原（cluster of differentiation，CD）分子水平，并最后统计分析。 结果 共分离、筛选出6条与T细胞免疫相关基因的mRNA表达条带，与对照组相比，VTE组的6条基因mRNA表达均显著下调，有统计学意义；进一步比较临床VTE组和临床对照组患者的T细胞表面CD分子水平发现，临床VTE组的CD+3和CD+8水平较临床对照组有显著降低（P分别0.01，0.001）。而临床VTE组的CD+4水平较临床对照组未见显著差异（P0.05）。同时两组比较CD+4/CD8+比值，临床VTE组显著升高（P0.001）。进一步分析其中9例CTEPH患者与临床对照组的T细胞表面CD分子水平，结果显示CTEPH患者的CD+8水平较临床对照组显著降低（P0.05），