建立并评估可快速筛选具抗癌潜力物质之生物技术平台.pdf

中華民國第 53屆中小學科學展覽會 作品說明書 高中組 生物（生命科學）科 第三名 040709 建立並評估可快速篩選具抗癌潛力物質之生物 技術平台 學校名稱：國立臺灣師範大學附屬高級中學 作者： 指導老師： 高二 林中行 謝育慈 謝淑貞 關鍵詞：細胞平台、p53 、螢光酵素分析法 建立並評估可快速篩選 具抗癌潛力物質之生物技術平台 摘要 p53 是一重要且多功能的腫瘤抑制蛋白，在超過50%的癌症病例中都有發現p53 的 突變，為了快速尋找具有活化p53 能力的藥物或功能性食物，並改善傳統動物模式或細 胞模式的費時、耗工及高成本，本研究設計改良reporter assay ，建立一個可快速、高通 量篩選出具活化 p53 功效之物質的細胞生物技術平台 。本實驗利用受 p53 之 DNA 結合 位所調控的螢光酵素(Luciferase)報導質體做為基礎，進一步將此質體送入MCF-7 人類乳 癌細胞中，成功挑選並建立出 MCF-7 轉殖細胞株 ，此細胞能在感受到 DNA 破壞時產生 顯著的螢光表現 ，並精確反映出p53 的轉錄活性。本生物技術平台 ，能以迅速、高通量 的優點取代傳統細胞模式中所使用之西方墨點法(Western blot)及RT q-PCR 。未來將著手 進行橄欖萃取物、羅漢果皂甘等功能性食物的抗癌功效鑑定。 1 壹、文獻探討 一、癌症(cancer) 細胞癌化可分為 initiation 、promotion 、progression等三個時期 。initiation肇 因於人體長期暴露在致癌因子下，導致組織或是器官解毒代謝異常，使DNA受到 傷害而造成突變，接著進入promotion ，此時不正常的癌細胞會不斷增生，但此期 之狀況仍為可逆，最後不正常的癌細胞會持續惡化並侵襲及轉移至其他部位，稱 為progression (Surh, 2003) 。 長期發炎的環境會不斷刺激白血球與巨噬細胞產生發炎反應並釋出活性氧化 物與活性氮化物 (reactive oxygen and nitrogen species) 造成鄰近正常細胞DNA損 傷，而此狀況則可能導致 p53 基因產生突變 ，若細胞修復DNA時發生異常，致使 基因突變 ，細胞便會不正常增生 (Maeda Akaike, 1998; Yamanishi Y. et al., 2002) 。 此外，Mantovani 等人在回顧文獻中也表示長期的慢性發炎會增加罹患膀胱 癌、胃炎、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、攝護腺癌與甲狀腺癌的風險 ，若在發炎 的期間給予抑制發炎的藥物，可降低癌症的發生率及死亡率(Mantovani et al.,2008) 。 二、p53 (一) 簡述 1979年，Lane與Crawford在Simian virus 40 (SV40)所轉型(transform)的細胞 萃取物中發現一分子量53kDa的蛋白質，因而命名為p53 (Lane Crawford, 1979) 。 p53為重要的腫瘤抑制蛋白，屬於最早發現的腫瘤抑制基因之一，已知有 50%以上的人類腫瘤細胞中含有p53抑癌基因的突變(Hollstein et al., 1991)或 未被活化，而在人類癌細胞中，p53基因最常發生的突變類型為錯誤型點突變 (missense poin