蜜蜂螺原体细胞骨架相关基因mreb 的克隆表达及在螺原体二种形态时 .pdf

微生物学通报 Sep. 20, 2014, 41(9): 1771−1778 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130743 研究报告 蜜蜂螺原体细胞骨架相关基因mreB 的克隆表达及 在螺原体二种形态时的表达差异 周丹霞 危蓉萍 康昕 钱正宗 纪燕玲 于汉寿* ( 210095) 摘 要【目的】在大肠杆菌中克隆表达蜜蜂螺原体细胞骨架相关基因mreB1 5 ，并预测所编码 蛋白的理化性质，分析这些基因在螺原体螺旋状和非螺旋状时的表达水平，为进一步分析该基 因的功能奠定基础。【方法】通过PCR扩增，从Spiroplasma melliferum CH-1基因组中获得mreB1 5 基因，构建的重组表达载体pETmreB1 5分别在大肠杆菌BL21 中诱导表达，利用镍亲和树脂纯 化重组蛋白，通过在线工具预测MreB蛋白质的理化性质和功能域。利用Real-Time PCR 比较螺 原体CH-1在两种不同形态时mreB1 5基因的表达量。【结果】成功克隆到5个mreB基因，并在大 肠杆菌BL21 中高效表达。MreB蛋白分子量分别为36 、23 、23 、37和25 kD ，可能均为疏水性的 蛋白，属于MreB/Mbl蛋白质家族。荧光定量PCR结果显示，螺原体在非螺旋状时mreB1 5基因 的表达水平均远低于在螺旋状时基因的表达水平。【结论】本文第一次克隆表达了螺原体细胞 骨架相关基因mreB1 5 ，初步表明这些基因在螺原体形态方面可能具有重要作用，为后续研究 螺原体mreB基因在其运动和形态方面的功能提供了重要信息。 关键词螺原体，细胞骨架，mreB 基因，生物信息学，荧光定量 PCR Cloning and expression of cytoskeleton-related gene mreB and expression differences between two shapes of Spiroplasma melliferum ZHOU Dan-Xia WEI Rong-Ping KANG Xin QIAN Zheng-Zong * JI Yan-Ling YU Han-Shou (Key Laboratory of Microbiology of Agricultural Environment , Ministry of Agriculture, College of Life Sciences, Nanjing Agricultural University , Nanjing, Jiangsu 210095, China) Abstract: [Objective] mreB1 5, the cytoskeleton-related genes of Spiroplasma melliferum CH-1 were cloned and expressed in Escherichia coli . Then their proteins properties were predicted. Expression levels of these genes in spiral and non-spiral