朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的原核表达及其活性分析 - 应用与环境生物学报.pdf

2015-04-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.08008 / Chin J Appl Environ Biol 2015 21 ( 2 ) : 215-220 应用与环境生物学报 ， 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的原核表达及其活性分析* 1, 3 2, 3** 2, 3 1, 3 1, 3 1, 3 1, 3 2, 3 彭博 卜春亚 师光禄 李金玲 冯晓姣 韩晶玉 高品 王有年 1北京农学院植物科学技术学院 北京 102206 2北京农学院生物科学与工程学院 北京 102206 3北京农学院农业部都市农业（北方）重点开放实验室 北京 102206 AChE 摘 要 乙酰胆碱酯酶（ ）在神经信号传导过程中起重要作用，是氨基甲酸酯类和有机磷类农药的主要作用靶 标 . 对朱砂叶螨AChE进行体外表达和纯化，并分析其活性 . 将朱砂叶螨ace基因序列插入到原核高效表达载体pET- 30a pET-30a/ace Escherichia coli BL21 DE3 IPTG 中，构建表达载体 ，转入表达菌株 （ ）中， 诱导高效表达；镍柱纯化目的蛋 白，经SDS和Western Blot鉴定目的蛋白；以纯化的螨AChE为抗原制备抗螨AChE特异性抗体；改良的Ellman法 AChE . M 68 × 103 AChE 测定螨 活性 结果获得了相对分子质量（ r ）约为 的较高纯度的螨 蛋白，检测大部分为可溶性表达， 7 , 10 AChE . AChE IC = 5.4 mmol/L 酶活检测具有乙酰胆碱酯酶活性 并制备了 效价的抗螨 特异性抗体 采用重组 （ 50 ）检测毒 IC = 58.7 mmol/L 11 . AChE 扁豆碱抑制活性比螨粗酶液（ 50 ）灵敏度提高 倍 本研究构建了螨 体外高效表达载体并获得了 具有较好活性的重组螨AChE ，可为抗AChE杀螨剂的体外高通量筛选和以AChE为靶标的农药残留检测奠定基础. 图8 表 1 参 19 朱砂叶螨 乙酰胆碱酯酶 原核表达 纯化；半数抑制浓度 关键词 ； ； ； CLC Q786 : S433.