家畜传染病学实验指导：鸡白痢的检疫 免费.docVIP

实验三十五 鸡白痢的检疫 目 的 熟悉和掌握鸡白痢的血清学检疫方法。 内容及方法 快速全血平板凝集反应 1．主要材料： (1)鸡白痢全血凝集反应抗原，由农业部中国兽药监察所购得，或其他来源的合格产 品。抗原为福尔马林灭活的细菌悬液，每毫升含菌100亿。 (2)用具：玻璃板、注射针头、带柄不锈金属丝环(环直径约4.5mm)、巴氏滴管。 2．操作方法 先将抗原瓶充分摇匀，用滴管吸取抗原，垂直滴一滴(约0.05ml)于玻 片上，然后使用注射针头刺破鸡的翅静脉或冠尖，以金属环沾取血液一满环(约0.02ml)混 入抗原内，随即搅拌均匀，并使散开至直径约2cm为度。 3．结果判断： (1)抗原与血清混合后在2min内发生明显颗粒状或块状凝集者为阳性。 (2)2分钟以内不出现凝集，或出现均匀一致的极微小颗粒，或在边缘处由于临干前 出现絮状者判为阴性反应。 (3)在上述情况之外而不易判断为阳性或阴性者，判为可疑反应。 4．注意事项： (1)抗原应在2～15℃冷暗处保存，从杀菌之日算起有效期6个月。 (2)本抗原适用于产卵母鸡及1年以上公鸡，幼龄鸡敏感度较差。 (3)本试验应在20℃以上室温中进行。 二、血清凝集反应 1．血清试管凝集反应 (1)主要材料 鸡血清样品：以20或22号针头刺破鸡翅静脉，使之出血，用一清洁、干燥的灭菌试 管靠近流血处，采集2ml液，斜放凝固以析出血清，分离出血清，置4℃待检。 抗原：试管凝集反应抗原，必须具有各种代表性的鸡白痢沙门氏菌菌株的抗原成分，对 阳性血清有高度凝集力，对阴性血清无凝集力。固体培养中洗下的抗原需保存于0.25％～ 0．50％石炭酸生理盐水中，使用时将抗原稀释成每毫升含菌10亿，并把pH调至8.2～8.5， 稀释的抗原限当天使用。 (2)操作方法 在试管架上依次摆3支试管，吸取稀释抗原2ml置第1管，吸取各lml分置第2、3管。先吸取被检血清0.08ml注入第1管，充分混合后再吸取lml移入第2管，充分混合后吸取lml移人第3管，混合后吸出混合液lml舍弃，最后将试管摇振数次，使抗原—血清充分混合，在37℃温箱中孵育20h后观察结果。 (3)结果判断 试管1、2、3的血清稀释倍数依次分别为1：25、1：50、1：100，凝集阳性者，抗原显著凝集于管底，上清液透明，阴性者，试管呈均匀混浊；可疑者介于前两者之间。在鸡1：50以上凝集者为阳性。在火鸡1：25以上凝集者为阳性。 2．血清平板凝集反应 (1)主要材料 血清采集同试管凝集法；抗原与试管凝集反应者相同，但浓度比试管 法的大50倍，悬浮于含0.5％石炭酸的12％氯化钠溶液中。 (2)操作方法 用一块玻板以蜡笔按约3cm2画成若干方格，每一方格加被检血清和抗 原各1滴，用牙签充分混合。 (3)结果判定 观察30～60s，凝集者为阳性，不凝集者为阴性。试验应在10℃以上室 温进行。 复习题与作业 1．试比较鸡白痢检疫的全血平板凝集反应与血清平板凝集反应的异同点。 2．我国绝大多数鸡群鸡白痢的阳性率比较高，试分析其原因和拟定防制对策。