饲料分析与检测实验：黄曲霉毒素B1检验 免费.docVIP

实验十四 黄曲霉毒素B1检验 【学习目标】 了解饲料黄曲霉毒素B1检验的重要意义，掌握黄曲霉毒素B1检验的原理、检验方法，并能检验饲料中黄曲霉毒素B1。 一、检验方法 (一)黄曲霉毒素的定性方法 1.把100.0g样品与300.0ml提取溶剂(7份甲醇﹕3份水)放入均质打碎机，高速打碎1～3.0min以上。 2.待上液澄清，以Buchner漏斗用棉布抽气过滤，取80.0～150.0ml滤液于500.0ml分液漏斗(注1)。 3.加30.0ml苯于分液漏斗，振摇约30.0s,加入300.0ml水,待分离后排弃下层液。 4.上层液移至烧杯或蒸发瓶，水浴加热蒸干（注2），加0.5ml苯溶解,点少量(50.0μl)于滤纸上待干后以长波紫外光灯照射。 5.滤纸上无蓝色荧光，样品即不含黄曲霉毒素，若有蓝色荧光，则样品可能含有黄曲霉毒素。 注1：假如原料或饲料含高量油脂或大量脂溶性色素，则添加50.0ml己烷(Hexane)于分液漏斗，激烈振动约30.0s后加50.0～100.0ml水，水离废弃上层液，继续进行(3)程序。 注2：苯分取物中除黄曲霉毒素外，有些物质亦产生萤光或遮蔽黄曲霉毒素的萤光，为防止这些问题，将苯层移入50.0ml烧杯，杯中置10.0g无水硫酸钠与5.0g碱式碳酸铜，缓缓摇动后过滤于50.0ml蒸发瓶蒸干，加O.5ml苯溶解，继续(4)程序。 (二)半定量检验 1.微柱层析一法 此法适用于每kg样品中黄曲霉毒素含量10.0μg以上。 （1)样品提取 取碾碎的饲料50.0g，置于高速组织捣碎机中；加硅藻土lO.0g和浸取溶液150.0ml，捣碎3.0min，滤纸过滤。取滤液50.0ml于250.0ml烧杯中,加20.0ml饱和硫酸铵溶液，水130.0ml，硅藻土10.0g，搅拌并静置2.0min。过滤，取滤液lOO.0ml，置于125.0ml分液漏斗中，加苯3.0ml，振摇1.0min。弃去下面水层，再慢慢地加水50.0ml，待分层后，弃去下面水层，将苯移至小瓶中，加无水硫酸钠澄清。 （2)层析 将微柱底部插入苯液中，使苯前沿升到氧化铝层约l.0cm处，将柱外表擦干净。立即加入5.0ml展开溶剂于小试管中，将微柱底部插入展开5.0min。在紫外灯下观察，如有黄曲霉毒素B1，则在氧化铝层显示紫蓝色荧光环带。呈显著蓝紫色荧光表示污染程度约为lO.0μg/kg。荧光越强，污染越严重。如为阴性样品，则呈白色或灰白色，而无蓝紫色荧光带环。亦可与标准比较。 2.微柱层析二法 此法适合黄曲霉毒素在5.0μg/kg以上。 取过20.0目筛的样品50.0g，加250.0ml的浸取液(85.0％丙酮水溶液)，在高速组织搅拌机中捣碎3.0min(或电磁捣碎30.0min)。过滤，取滤液90.0ml置于上述制备的铁胶溶液中，搅拌1.0～2.0min。再过滤。取清滤液175.0～180.0ml于500.0ml分液漏斗内，加氯仿50.0ml提取约1.0min。放出氯仿层于250.0ml烧杯中。水浴上浓缩至微干，用2.0ml氯仿:丙酮(9:1)溶解后倒入柱，流干后，在紫外灯下观察，如有弗罗里土层呈现蓝紫色荧光环带，则黄曲霉毒素含量大于5.0μg/kg，如硅胶和弗里罗土层上呈现环带，则含量约大于20.0μg/kg。 二、检验方法评价 该项目可以定性检测饲料中的黄曲霉毒素，并且根据饲料中黄曲霉毒素的含量多少，有不同的检测方法，具有很好的使用价值。 1.微柱制备（微柱层析一法）： 微柱：4.0×200.0mm。制备顺序为：先在底部加少许石英棉，然后加1.5cm高的氧化铝，9.0cm高的干硅胶G。轻敲填实，无裂缝。可一次制备多支，置于干燥器中备用； 2.微柱制备（微柱层析二法）： 微柱：3.0×250.0nm。制备顺序为：石英棉，填塞5.0～7.0mm高的砂，5.0～7.0mm弗罗里土，2.0cm硅胶和1.0～1.5cm氧化铝。最后加上少许石英棉。