饲料分析与检测实验：（Van Soest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法.docVIP

实验六、（Van Soest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法 【学习目标】了解饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定意义，掌握饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）检测的原理、实验方法，并注意对测定结果的分析和讨论。 一、目的 传统的粗纤维测定方法存在着明显的缺点，即所测得的结果包括部分半纤维素和纤维素，以及大部分木质素在内的一组复合物，又因为有部分半纤维素和少量纤维素、木质素溶解于酸碱溶液中，被计算到无氮浸出物中去了。因此，传统方法测得的饲料中粗纤维和无氮浸出物的含量均不能反映出饲料本身被家畜利用的真实情况。而范氏洗涤纤维分析法则能弥补这些不足，可以准确地获得植物性饲料中所含的半纤维素、纤维素、木质素以及酸不溶灰分的含量，这在纤维素的分析测定中是一项非常重要的改革。 二、原理 植物性饲料如一般饲料、牧草的粗纤维经中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）分解，则大部分细胞内容物溶解于洗涤剂中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白质，统称为中性洗涤剂溶解物（NDS），而不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），这部分主要是细胞壁部分，如半纤维素、纤维素、木质素、硅酸盐和极少量的蛋白质。 酸性洗涤剂可将中性洗涤纤维（NDF）中各组分进一步分解。植物性饲料可溶于酸性洗涤剂部分称为酸性洗涤剂溶解物（ADS），主要有中性洗涤剂溶解物（NDS）和半纤维素，剩余的残渣称为酸性洗涤纤维（ADF），其中含有纤维素、木质素和硅酸盐。此外，由中性洗涤纤维（NDF）与酸性洗涤纤维（ADF）值之差即可得到饲料中半纤维素的含量。 酸性洗涤纤维经72.0%的硫酸消化，则纤维素被溶解，其残渣为木质素和硅酸盐，所以，从酸性洗涤纤维（ADF）值中减去72.0%硫酸消化后残渣部分即为饲料中纤维素的含量。 将经72.0%硫酸消化后的残渣灰化，灰分则为饲料中硅酸盐的含量。而在灰化中逸出的部分即为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。（见下图）。 植物性饲料 中性洗涤剂处理 中性洗涤剂溶解物(NDS) 中性洗涤纤维(NDF) (蛋白质、脂肪、淀粉、糖) (半纤维素、纤维素、木质素、硅酸盐) 酸性洗涤剂处理 酸性洗涤纤维(ADF) 酸性洗涤剂溶解物(ADS) (纤维素、木质素、硅酸盐) (半纤维素) 72.0%H2SO4 溶解物(纤维素) 残渣 500.0℃灼烧2.0h 烧尽(逸出) 残渣 酸性洗涤木质素(ADL) (灰分、即硅酸盐) 图：范氏分析法原理示意图 三、仪器设备 1.冷凝器或冷凝装置 2套； 2.分析天平 感量0.0001g； 3.高脚烧杯 600.0ml，2个； 4.表面皿 直径12.0cm，2个； 5.抽滤装置 (真空泵、抽滤瓶、联结管、坩埚垫) 1套； 6.玻璃坩埚 40.0ml(G1) 2个； 7.长玻棒（胶头） 16.0cm，1个； 8.烧杯 500.0ml，2个； 9.滴管 1个； 10.洗瓶 1个； 11.干燥器 直径200.0mm，1个； 12.真空泵 1/4马力,1台, 13.电热板或六联调温电炉 1台； 14.干燥箱 1台； 15.茂福炉1台； 16.量筒 100.0ml 2个； 17.橡皮管 壁厚0.5-0.7cm， 18.容量瓶1000.0ml 1个； 19.坩埚钳 长柄或短柄，各1把； 20.药匙勺 1个； 21.定时钟 1个； 四、化学试剂 1.中性洗涤剂 （3.0%十二烷基硫酸钠）准确称取37.2g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14N2O8Na2.2H2O，化学纯，372.24）和13.6g硼酸钠（Na2B4O7，化学纯，381.37），一同放入1000.0ml烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30.0g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，化学纯，288.38）和10.0ml乙二醇乙醚（C4H10O2，化学纯，90.12）；称取23.0g无水磷酸二钠（Na2HPO4，化学纯，141.96）置于另一烧杯中，加少量蒸馏水微微加热溶解后，倾入第一烧杯中，在容量瓶中稀释至1000.0ml，此溶液pH值在6.9-7.1左右（pH值不需要调整）。 2.酸性洗涤剂（2.0%十六烷三甲基溴化铵） 称取20.0g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，化学纯，364.47）溶于1.00mol/L硫酸溶液，搅拌溶解，用1.00mol/L硫酸溶液稀释至1000.0ml。 3.1.00mol/L硫酸 取约55.48ml浓硫酸（H2SO4，化学纯，96.0%，比重1.84），慢慢加入已装有500ml蒸馏水的烧