柑橘citserkrlike基因原核表达载体的构建与表达 - 江苏农业科学.pdf

— ２２— 江苏农业科学　２０１６年第４４卷第４期 葛晓霞．柑橘ＣｉｔＳＥＲＫ－ＬＩＫＥ基因原核表达载体的构建与表达［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（４）：２２－２４． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．０４．００６ 柑橘 ＣｉｔＳＥＲＫ－ＬＩＫＥ基因原核表达载体的构建与表达 葛晓霞 （武汉生物工程学院应用生物技术研究中心，湖北武汉４３０４１５） 　　摘要：用 ＲＴ－ＰＣＲ扩增伏令夏橙体细胞胚发生类受体蛋白激酶（ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ， ＳＥＲＫ）基因ＯＲＦ区全长，克隆入载体，酶切后亚克隆入原核表达载体，并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ观察 ＣｉｔＳＥＲＫ－ＬＩＫＥ基因的 原核表达情况。结果显示，成功构建了ｐＥＴ－ＣｉｔＳＥＲＫ１－ｌｉｋｅ原核表达重组质粒，该重组质粒在大肠杆菌中可经ＩＰＴＧ 诱导表达分子量约为６９ｋｕ的融合蛋白，与预测蛋白一致。 　　关键词：柑橘；ＣｉｔＳＥＲＫ１－ｌｉｋｅ；表达载体；构建；原核表达 　　中图分类号：Ｓ１８８；Ｓ６６６．０１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）０４－００２２－０３ ［９－１０］ ［１１］ ［１２－１３］ 　　植物体细胞胚胎发生作为植物细胞全能性的一种表达方 橘 、仙客来 、菠萝 等。 式，是高等植物合子胚发育早期事件中基因表达调控研究的 本研究在前期克隆获得柑橘体细胞胚发生类受体蛋白激 ［１］ ［１０］ 理想模型 。体细胞胚发生类受体蛋白激酶（ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙ 酶基因ＣｉｔＳＥＲＫ１－ｌｉｋｅ的基础上 ，构建了ＣｉｔＳＥＲＫ１－ｌｉｋｅ ｏｇｅｎｅｓｉｓｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ）是在体细胞胚发生过程中发挥 的原核表达载体，为今后大量表达、纯化 ＣｉｔＳＥＲＫ１－ｌｉｋｅ蛋白 重要作用的一类激酶，属于 ＬＲＲ－ＲＬＫ亚家族。Ｓｃｈｍｉｄｔ等 和开展相关的功能研究奠定了基础。 首先从胡萝 卜悬浮培养的胚性细胞中分离出第 １个ＳＥＲＫ基 １　材料与方法 因，并发现它只在胚性细胞内表达且只表达到体细胞胚的球 ［２］ 形期 。在其他物种中，体细胞胚发生过程与ＳＥＲＫ基因紧 １．１　ｐＭＤ－ＣｉｔＳＥＲＫ１－ｌｉｋｅ克隆载体的获得 密地联系在一起，相继在多个物种中克隆并鉴定了ＳＥＲＫ基 根据ＧｅｎＢａｎｋ登录的ＣｉｔＳＥＲＫ－ｌｉｋｅ基因序列 （登录号 ［３］ ［４－５］ ［６］ ［７］ ［８］ 因，如鸭茅 、苜蓿 、水稻 、小麦 、马铃薯 、柑 为ＦＪ８５１４２２），设计正反向引物，ＦＰ：５′－ＡＴＧＡＡＧＡＣＴＡＡＧ ＧＴＴＴＧＧＧＣＴ－３′；ＲＰ：５′－ＴＣＡＣＣＴＴＧＧＡＣＣＡＧＡＴＡＡＣＴＣ－ 收稿日期：２０１５－０３－１３ ３′。ＰＣＲ反应在ＰＴＣ－２００Ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ中进行。２０ Ｌ反应 μ 基