类人胰岛素原多拷贝重复基因原核表达载体的构建与表达.pdf

（ ） 第 卷第 期 南昌大学学报 理科版 Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．３ ３８ ３ 　 　 　　　 年 月 　　 Ｊｏ （ ） Ｊｕｎ．２０１４ １４ ６ ｕｒｎａｌｏｆＮａｎｃｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ ２０ 　 　 ｇ ｙ 　 　 文章编号： （ ） １００６３４ ０４ ０２ ０９ 　　 － － － 类人胰岛素原多拷贝重复基因原核 表达载体的构建与表达 ， １ ２ １ １ ＊ ， ， 罗联 忠 陈仲巍 叶子 坚 （ ； ， ） 厦门 医学高等专科学校 药 学系 厦门 大学海洋与地球 学院 福建 厦门 １． ２． ３６１００８ 　 ： ， ， 。 摘 要 根据大肠杆菌密码子偏好性 优化人胰岛素原基因序列 同时用 个赖氨酸取代 链 重叠 扩增法 ２ Ｃ ＰＣＲ 　 ， 。 、 克隆优化的类人胰岛素原基因 ＣＲ扩增引物中引入胰蛋白酶酶切位点和核酸限制性内切酶识别位点 经酶切 Ｐ ， ， 拼接获得类人胰岛素原多拷贝基因 并构建人胰岛素原基因多拷贝原核表达载体 转化感受态大肠杆菌诱导表达 。 ， ， 融合蛋白 表达产物经 Ｄ Ａ 电泳 考马斯亮兰染色和融合蛋白染色条带光密度分析表明 含有 拷贝的类 Ｓ ＳＰ ＧＥ ４ － ， 人胰岛素原重复基因序列原核表达载体的诱导表达类人胰岛素原效率最高 是单拷贝类人胰岛素基因原核表达载