泛素特异性蛋白酶18在肝癌细胞中的表达及其对生物 - 中国全科医学.pdf

·４０７７· ·论著 · 泛素特异性蛋白酶１８在肝癌细胞中的表达 及其对生物学活性的影响研究 颜 伟，刘安文，蔡 婧，汪弋汀，曾小莉，陈雅洁，熊 乐，国畅阔 　　 【摘要】　目的　检测泛素特异性蛋白酶１８（ＵＳＰ１８）在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性 （细胞增殖、细胞 克隆、细胞周期、细胞凋亡）的影响。方法　２０１３年７月—２０１４年７月选取５种肝癌细胞株 （ＨｅｐＧ２、ＨｅｐＧ２２１５、 Ｈｅｐ３Ｂ、Ｈｕｈ－７、ＳＭＭＣ－７７２１），采用实时荧光定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法分别检测ＵＳＰ１８ｍＲＮＡ和 ＴＭ ＵＳＰ１８表达水平，选择表达活性最强的细胞株进行小干扰 ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）转染。利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００法将 ＵＳＰ１８ ｓｉＲＮＡ转染肝癌细胞，分为正常组、阴性对照组、ｓｉＲＮＡ１组、ｓｉＲＮＡ２组、ｓｉＲＮＡ３组。采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ 法检测干扰效率，四甲基偶氮唑蓝 （ＭＴＴ）法绘制细胞生长曲线，平板克隆形成实验检测克隆形成率，流式细胞术检 测细胞周期，ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果　５种肝癌细胞株中ＵＳＰ１８ｍＲＮＡ和ＵＳＰ１８表 达水平比较，差异有统计学意义 （Ｐ＜００５），其中Ｈｅｐ３Ｂ肝癌细胞株中ＵＳＰ１８ｍＲＮＡ和ＵＳＰ１８表达水平高于其他４种 肝癌细胞株 （Ｐ＜００５），故选取Ｈｅｐ３Ｂ肝癌细胞株进行后续实验。Ｈｅｐ３Ｂ肝癌细胞株转染ＵＳＰ１８ｓｉＲＮＡ后４８ｈ，转染 效率达 （９１００±５６７）％。５组干扰效率比较，差异有统计学意义 （Ｐ＜００５）；其中ｓｉＲＮＡ１组、ｓｉＲＮＡ２组、ｓｉＲＮＡ３ 组干扰效率高于正常组和阴性对照组 （Ｐ＜００５）。转染后 １、２、３ｄ，ｓｉＲＮＡ１组、ｓｉＲＮＡ２组、ｓｉＲＮＡ３组吸光度低于 正常组和阴性对照组 （Ｐ＜００５）。ｓｉＲＮＡ１组、ｓｉＲＮＡ２组、ｓｉＲＮＡ３组克隆形成率低于正常组和阴性对照组，细胞凋亡 率高于正常组和阴性对照组 （Ｐ＜００５）。５组细胞周期分布比较，差异有统计学意义 （Ｐ＜００５）。正常组与阴性对照 组吸光度、克隆形成率、细胞周期分布、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义 （Ｐ＞００５）。结论　ＵＳＰ１８在Ｈｅｐ３Ｂ肝 癌细胞株中的表达较高，ＵＳＰ１８基因敲减可以抑制肝癌细胞增殖、减少细胞克隆、阻滞细胞周期进程，增加细胞凋亡。 　　 【关键词】　肝肿瘤；泛素特异性蛋白酶；细胞增殖；细胞凋亡 　　 【中图分类号】Ｒ７３５７　 【文献标识码】Ａ　ｄｏｉ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００７－９５７２２０１５３３０１３ 　　 颜伟，刘安文，蔡婧，等泛素特异性蛋白酶１８在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性的影响研究 ［Ｊ］．中国 全科医学，２０１５，１８（３３）：４０７７－４０８３［ｗｗｗｃｈｉｎａｇｐｎｅｔ］ 　　 ＹａｎＷ，ＬｉｕＡＷ，ＣａｉＪ，ｅｔａｌＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＵＳＰ１８ｉｎｈｅｐａｔｏｍａｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙ ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＧｅｎｅｒａｌＰｒａｃｔｉｃｅ，２０１５，１８（３３）：４０７７－４０８３ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＵＳＰ１８ｉｎＨｅｐａｔｏｍａＣａｒｃｉｎｏｍａＣｅｌｌｓａｎｄＩｔｓＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｃｔｉｖｉｔｙ　ＹＡＮＷｅｉ，ＬＩＵＡｎ－ｗｅｎ， ＣＡＩＪｉｎｇ，ｅｔａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｉｘｔｈＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉａｎｇｘｉＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００６，Ｃｈｉｎａ 　　 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＵＳＰ１８ｉｎｈｅｐａｔｏｍａｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ（ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｅｌｌｃｌｏｎｅ