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andMethods Techniques Pli3替嚣器脚碜函 www．pibb．at．on 采用亲和层析结合制备凝胶电泳获得高纯度的 重组抗原蛋白用于制备蛋白质芯片宰 零江缡1≥舟掌靓嚣李禽惠势胡海嚣朝莩鼙 吕 芳辞苏幼红辞耱立崭嚣杨治华封” (1赣疆大学生命科学与技术学鲵，新疆生物资源墓磷．TrOt点实验室，乌鲁来齐830046： 目中豳协和藏料大学肿瘤研究所，北京100027；噍阁有限公司北京分公司，北京100010) 摘要为了得到制各抗原芯片所需的高纯度重组抗原蛋白，需要建立一赣适合于多种重组抗原表达和纯化的技术路线．采用 了亲和层析结合制备胶电泳的方法。对16种用于构建蛋白质芯片的食管瘸相关抗原基因进行了克隆重组并在犬肠杆菌中进 SDS制各胶电泳作避～步缝化。经过透析复性后，用于制备蛋自璇芯片。采用亲和层析纯化重组蛋白，褥举梵71％， 蛋鑫震芯片，在捡溺撬藏与抗体这一对反应孛瞧曩毒较高静敏感经嚣耱簿经，适合大规模盘漶抗俸豹检测。磺究淡髑，采爝 亲和层拆结合割备凝胶毫泳缝能挽原蛋自，是一条简便快捷，适合嚣簧鬃不大，但对纯度要求比较高静蛋包疆器盼制备的技 术路线。 关键词亲和层析，制备电泳，肿瘤抗原，蛋白质芯片 学科分类号Q784，R730．3 近年来，越来越多驹研究表明，在肿瘤患者体 化，麟恐需要建立一套适合子多种耋鳃抗原表达积 内存在多种肿瘤相关摭激诱导的垂身撬秘t嘲。我 缝化憋技本鼹线，在较短爵闯鑫获褥麓缝发瓣重维 餐逶建蹲食营瘗缝织憋cDNA文库进行薅选获褥撬豢鬣囊蠲予镧备蛋白震芯冀． 了多个食管癌穗关豹撬琢分子，采焉这些抗骧黯一 在零研究中，我稍采焉Ni忒rAHis．缀合豹层 定数量的食管癌病例进行捻测的结果表明嘲，这些 析柱，初步纯化带有His标签的重组表达鬣自，然 抗原对于食管癌血清中的囱身抗体具有较高的敏感 后聚用制备级SDS．PAGE一步纯化获得纯度 性，提示这些抗原作为筛森食管癌病例的可能．但 90％的趱组抗原蛋白，经过相同的复性和浓缩步骤 目前采用的常规检测m消中抗体的方法主要有 后，可得到毫克级的高纯度重组抗原蛋白．采用亲 ELISA、Western blot等。遂些方法只能检测到单和层析结合制备凝胶电泳技术可以不必对每种重组 一种类的抗体，无法用于多个分子标志物的大规模 抗原的纯化进行条件优化，非常适合需鼷摄不大， 人群检测，对于同时测定大裁样本显得无能为力。 傻对纯度要求比较高鲍蛋白质芯片的制作。 舅努，这些方法还存在敏感性不够，以及蕨震样本 量过多酶缺点。蛋鑫矮蕊麓楚最近死年发展莛来戆 新技术，其有裹敏感瞧翔淼通量以及检溺结果酶线 萌蕊掷sosolos)资动顼露． 性范围宽等优点，可以爝于多种抗原的联合检测． ·’通讯联系人． 但是，制作蛋白质芯片需鞭较高纯度的抗原蛋白， 并且需要同时对多种鲎组抗原蛋白进行表达和纯 收稿翻期；2008-04-05，接受日期：2008-06-02 万方数据 2008；35(12)攀江体等：采用亲和鼷板结合制备凝胶暾泳获褥高纯度的重缀抗原蛋白用于制备鹫囱质芯片 ·1445· mmol／LTris-HCl 1材料与方法 后加入趣声缓；串演(50 pH8。0， ，LEDTA，0．1 g／L溶菌酶，1班Triton 1．1材料 12 X．1