小鼠肝脏干细胞提取法的优化 - 首都医科大学.pdf

2008年 8月 　　　　　 首 都 医 科 大 学 学 报 　　　A ug. 2008 第 29卷 　第 4 期 　　　　 Jou rnal of Cap ital M edical U n iversity Vol. 29　No. 4 ·技术方法 · 小鼠肝脏干细胞提取法的优化 路 　欣 　宾文婷 　许 　晴 　史小林 (首都医科大学基础医学院生殖医学研究中心 ) ( ) ) ( ) 　　肝脏干细胞 liver stem cell, L SC 源于前肠内胚 组 、生后 5 d乳鼠 5组 ,每组 10例 。 层 ,近年研究表明 , 除肝脏外 ,骨髓 、胰腺等组织中也 ) 2 肝细胞的分离 :用酶消化法制备肝细胞悬液 。 存在 L SC。L SC主要包括胚胎时期的干细胞样肝原始 生后乳鼠断髓处死 ,解剖镜下取出肝脏 ,天平称量肝脏 细胞 ( liver original cell) 和成体时期 的肝卵 圆细胞 质量 。用含 0. 1%双抗的 H ank s液清洗肝脏 ,剪碎 ,置 ( hep atic oval cell, HOC) 。HOC 是成年哺乳动物肝脏 于离心管中。滴加 0. 25%胰蛋白酶液及 0. 1% Ⅳ型胶 μ 中一类直径约 10 m 的卵圆形细胞 ,存在于终末小胆 原酶液各 1. 0 mL , 37 ℃震荡消化约 50 m in。加等量含 ( ) [ 1 ] ( ) 管 H ering , 1956年由 Farber 在大鼠肝癌模型中首 15%胎牛血清的 DM EM / F12 1 ∶1, D F12 培养液终止 先发现并命名 ,具有分化为肝细胞和胆管细胞的双向 消化 ,吹打成细胞悬液 , 150 目细胞筛过滤 , 4 ℃, 2 000 潜能[ 2 , 3 ] ,并与肝脏损伤后的强大再生修复能力密切 r/m in离心 10 m in ,弃上清 ,加入 D F12 培养液呈细胞 相关 。L SC 的分离和培养是临床应用细胞替代治疗 悬液 。制备胎鼠肝细胞悬液 :动物断髓处死取出小鼠胚 的关 键 , 目前 多 采 用 荧 光 活 化 细 胞 分 类 法 胎 ,用含 0. 1%双抗的 H ank s液清洗数次 ,解剖镜下依 ( fluore scence activated cell sorter, FACS) ,其分离效率 次取出胚胎肝脏并收集在一起 ;滴加 1 ∶1混合 0. 25% 和细胞纯度均较高 。 ( ) 胰蛋白酶液与 0. 1% Ⅳ型胶原酶液 各 0. 8 mL , 于 本研究对 L SC 在胚胎时间段的数量差异进行比 37 ℃震荡消化 30 m in。加等量含 15%胎牛血清 的 较观察