紫外吸收光谱法测定维生素c片剂中vc的含量.ppt

仪器分析实验 荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量 【实验目的】 1．了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理。 2．掌握荧光分析方法。 【实验原理】 维生素B2 在230～490 nm范围波长的光照射下，激发出峰值在526 nm左右的绿色荧光，在 pH为 6～7范围内荧光强度最大。基于上述性质建立核黄素的荧光分析法，选择合适的激发波长、荧光波长和实验条件，即可进行定量测定。 在稀溶液中，当入射光强度、样品池厚度、仪器工作条件不变时，测得的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。 If = κc 【实验步骤】 1. 实验条件的选择 （1）激发光波长和荧光波长的选择 25 mL 比色管 + 1.00 mL 100 μg·mL－1 核黄素标准溶液 ————————→ 摇匀——→ 固定荧光波长526 nm—→扫描激发波长（220～500 nm ）。 固定激发波长为442 nm —→扫描荧光波长（400～700 nm 范围），确定最大荧光强度。 反复：固定激发扫发射，固定发射扫激发，确定最佳激发和发射波长。 （2）酸度的选择 （25 mL 比色管） 2．标准曲线的绘制（25 mL 比色管） 3．样品测定 （1） 药片 ① 50 mL烧杯 + 1 片维生素B2 + 约 12 mL 5％醋酸溶液 ————————→ 取下冷却———————→ + 5% 醋酸溶液稀至刻度，摇匀。 ② 离心管 + 数mL（1）中的溶液——— 。 ③ 25 mL 比色管 + 1.00 mL 离心液（用移液管准确移取）+ 5％醋酸溶液稀至刻度，摇匀——→ 测荧光强度。 （2）注射液 ① 取VB2 注射液1支，将内容物置于50 mL 容量瓶中 + 5% 醋酸溶液稀至刻度，摇匀，即为分析液（已配好）。 ② 25 mL 比色管 + 1.00 mL VB2 分析液（用移液管准确移取）+ 5％醋酸溶液稀至刻度，摇匀。————→ 测荧光强度。 在标准曲线上查出核黄素的浓度并根据样品取样量和稀释倍数，计算出维生素B2中核黄素的含量（mg·片－1或mg·支－1 ）。 【注意事项】 维生素B2水溶液遇光易变质，标准溶液应新鲜配制，维生素B2的碱性水溶液亦易变质。 【思考题】 1．试述荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计在结构上有哪些不同点？ 2．在选择最佳激发光波长和荧光波长时，为何需要反复测量激发光谱和发射光谱？ 实验报告格式 * YANGTZE NORMAL UNIVERSITY * YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 主讲：江 虹 jianghongch@163.com 化学化工学院 用5% HAc 溶液稀至刻度 转移部分于 比色皿中 If λex = 442 nm λem = 526 nm pH 稀至25 mL 刻度 10％氢氧化钠 稀至25 mL 刻度 5% 醋酸 稀至25 mL 刻度 1∶1 盐酸 1.00 1.00 1.00 核黄素(mL) 100μg·mL－1 3 2 1 编号 试剂 λex = 442 nm， λem = 526 nm If 稀至 刻度 稀至 刻度 稀至 刻度 稀至 刻度 稀至 刻度 稀至 刻度 最佳pH 溶液 （5% 醋酸） 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 100μg·mL－1 核黄素(mL) 6 5 4 3 2 1 编号 试剂 用玻棒捣碎药片 水浴上加热，使样品完全溶解 转入50 mL 容量瓶 离心分离 维生素C的紫外光谱图(λmax=264nm) 维C：100μg/mL（0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mL） 标准曲线