毕业论文-动物源性食品中磺胺类药物的检测.docVIP

毕 业 论 文（设计） 题 目 指导老师 专业班级 食品营养与检测1 姓 名 学 号 2015年5月日 采用超高效液相色谱-串联质谱技术测定中十六种磺胺类药物的残留。样品经乙腈提取，提取液旋发浓缩至近干，残渣用1mL，通过Waters C18色谱柱分离，以乙腈和0.1%（体积分数）的甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾-正离子多反应监测的质谱模式，以基质外标法进行定量分析。实验结果表明，16种磺胺类药物在1-200 μg/L的浓度范围内线性相关系数均大于0.99，该方法的定量限为3.0～5.0μg/kg，在3个浓度添加水平下，各种磺胺类药物的总体回收率为80.2%～130.1%，相对标准偏差均小于7.6%。该检测方法操作简单快速、回收率和灵敏度高、重现性好、检出限低，满足动物源性食品中十六种磺胺类药物的检测要求。 关键词： 目 录 引言 1 1材料与仪器 2 1.1 2 1.2实验试剂 2 1.3实验仪器 2 2方法 3 2.2 3 2.2.1 色谱条件 3 2.2.2 质谱条件 3 3 结果与 4 3.1色谱条件的优化 4 3.2质谱条件的优化 5 3.3线性范围 5 3.4回收率和精密度 6 3.5检出限和定量限 8 3.6实际样品测试 8 结论 9 参考文献 10 μg/kg，其中日本对磺胺二甲嘧啶的最大残余限量要求小于10μg/kg [2]。因此，对动物源性食品中磺胺类药物残留的检测的研究具有重要的现实意义。 磺胺类药物残留检测的方法主要有酶联免疫法、液相色谱法和液相色谱-串联质谱法。近年来，国内外有关于测定动物源性食品中磺胺类药物的方法报道有较多。冯才伟等建立酶联免疫法对猪肉中的磺胺药物残留的检测，最低检测限为1.5μg/kg，平均回收率范围为76.1%～101.7%5μg/kg,样品的加标回收率为80.1%～96.5%UPLC-MS/MS的深入研究和该技术应用的普及，UPLC-MS/MS已经成为药物分析的有利工具。 本文以猪肉和奶粉为检测对象利用超高效液相串联质谱技术建立动物源性食品中十六种磺胺类药物的定性和定量一次进样完成检测的方法。该方法具有高效、快速、检出限低、灵敏度高的特点。 1材料与仪器 1.1实验材料 猪肉，奶粉(实验室提供 1.2实验试剂 Dr.E公司。 标准溶液的配制：分别准确称取10.0mg上述标准品（需折算标准品纯度）于10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成1.0mg/mL的储备液，密封储存于-18℃冰箱中。分别吸取50μL的1.0mg/mL的标准溶液于10mL容量瓶，用甲醇定容，配制成5.0μg/mL的混合标准溶液，用时再稀释成一系列浓度的标准溶液，待测。 1.3实验仪器 AcquityTM超高效液相色谱仪和XevoTMTQ-MS质谱仪，美国Waters公司产品，配有电喷雾电离接口（ESI)及Masslynx数据处理系统； Milli-Q超纯水器，美国Millipore公司产品； 旋转蒸发仪，B-740，瑞士BUCHI公司； 高速离心机，美国Thermo公司； 涡旋混合仪，WH-861，太仓市华利达实验设备有限公司。 5g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管中加入20g无水硫酸钠和20mL乙腈，均质2min后以8000 r/min超速离心3 min。上清液倒入100mL鸡心瓶中，残渣再加入20mL乙腈，重复上述操作一次。合并上清液后，向鸡心瓶中加入10mL异丙醇，用旋转蒸发器于50℃水浴蒸干，准确加入1mL流动相和1mL正己烷溶解残渣。转移至5mL离心管中，涡旋1min,以3000r/min离心3min,将上层正己烷弃去，再加入1mL正己烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液体。按上述操作步骤制备样品空白提取液。取下层清液，过0.22μm滤膜后，用超高效液相色谱-串联质谱仪测定。 2.2实验条件 2.2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱2.1mm×100mm,粒径1.7μm；柱温：35℃；样品温度：25℃；进样体积：5μL；流速：0.2mL/min;流动相：乙腈(A),0.1%甲酸水溶液(B)；按1洗脱程序进行梯度洗脱表1梯度洗脱程序 时间min) A：乙腈%) B：0.1%酸%) 0～5 5～9 9～13 13～15 15～16 16～17 17～20 10 10～40 40 40～90 90 90～10 10 90 90～60 60 60～10 10 10～90 90 ESI)；扫描方式：正离子模式；检测方式：多反应监测（MRM2.80kV，离子源温度为150℃，脱溶剂气温度