CD59基因突变与蛋白质糖基化相关性的分析.pdfVIP

中文摘要 0D59基因突变与蛋白质糖基化相关性的研究 中文摘要 目的通过转基因技术获得两种突变CD59真核表达分子，探讨其糖基化前后抗 补体活性的变化，为糖尿病血管增殖症的发生机制提供理论基础。 位置改变，构建两种不同的CD59突变基因，各设计两条互补突变引物和两条常规 引物，以已构建CD59cDNA重组质粒为模板，重组PCR定点诱变扩增突变基因， hamster blot)检测筛 酶免疫组化(EIH)、流式细胞仪法(FACS)和免疫印迹技术(Western 选CD59突变基因蛋白高表达株。染料释放实验初步检测突变CD59蛋白糖基化前 后抗补体活性的变化情况。大量扩增收获高表达细胞备用。 结果PCR定点诱变成功获得目的CD59突变基因，序列测定及酶切鉴定均证实 G41 达突变CD59分子的阳性细胞克隆HM3和HM4。Westernblot检测出阳性细胞克隆 分子具有抗补体活性，糖基化后抗补体活性明显降低。大量扩增收获阳性细胞克隆 以备进一步测定突变CD59功能及制备抗突变CD59McAb。 成功，脂质体转染法将重组质粒导入真核细胞并获得膜表面突变CD59分子的表达， 表达突变CD59分子具有抗补体活性，但易被糖基化，糖基化后抗补体活性明显降 低，为进一步研究糖尿病血管增殖症的发生机制奠定了基础。 硕士研究生： 任书荣(病原生物学专业) 研究生导师： 高美华教授 关键词CD59；基因定点突变；CHO细胞：真核表达：功能研究 +本课题为国家自然科学基金项目(项目编号 英文摘要 A of betweenCD59 studyrelationship mutagenisis and proteinglycation ABSTRACT ToconstructtwomutantCD59 and objective eukaryoticexpressionsystem whether couldinhibitthe ofmutantCD59． investigateglycation activity MethodsSite—directed to residue370r38、vitIl mutagenesisreplace histidine(H)， was recombinant PCR．The were performedby mutagenicprimersdesignedaccording totwomutantCD59s．Successfulwasconfirmed mutagenesis bysequenceanalysis． mutantCD59DNAswereclonedintothemammalian vector expressionpALTER—MAX and intoCHO with marker tran