静电法制备人视网膜色素上皮细胞微胶囊的实验研究.pdfVIP

中华临床医师杂志(电子版)2012年3月第6卷第6期 ChinJClinicians(ElectronicEdition)。March15，2012，Vo1．6，No．6 · 新 技 术 ·新 方 法 · 静电法制备人视网膜色素上皮细胞微胶囊的实验研究 赵亚群 高冬晓 周敬安 王永 狄淬砺 摘【要】 目的 探索用静电法制备人视网膜色素上皮(hRPE)细胞海藻酸钠一壳聚糖一海藻酸钠 (ACA) 微胶囊。方法 用自制的静电微胶囊发生装置制备包被了hRPE细胞的ACA微胶囊 ，显微镜下观察微胶囊 形态，测量微胶囊直径，细胞计数板进行常规计数，台盼蓝染色计算细胞存活率。结果 成功制备出直径376～ 432 m[平均(403±13．2) m]的hRPE细胞的ACA微胶囊。细胞总数、细胞存活率和存活总数在当天分别 是(3．04-0．2)×10、(86±10．9)％、(2．44-0．3)×10；第 1天分别是 (2．8-40．3)×10、(84-411．2)％、 (2．3±0．3)×10；第3天分别是 (3．2±0．4)×10、(87±15．7)％、(2．5±0．4)×10；第 7天分别是 (6．1± 0．6)×10‘、(75±16．8)％、(4．5±0．5)×10。结论 用 自制的静电微胶囊发生装置能成功制备出hRPE细 胞的ACA微胶囊；培养 1周后，微胶囊内细胞增殖明显。 【关键词】 帕金森病；移植； 胶囊；人视网膜色素上皮细胞 帕金森病是因为中脑黑质多巴胺能神经元退行性病变 ，引 的高压静电成膜装置，针尖离液面距离为 15mm，电场电压为 起纹状体内多巴胺减少而引起的以运动迟缓、静止性震颤、肌肉 7kV，注射针头型号为5，针头内径为0．292mm，推进速度为 强直为主要临床症状的综合征。其主要治疗方法是药物治疗和 20ml／h时，电极距离30mm，将细胞混悬液滴入 100mmol／L氯 手术治疗，但疗效均不理想”J。从理论上来说移植能够持续分 化钙溶液内使其胶化(体积比1：10—1：8)，固化 15min。(2)凝 泌多巴胺的细胞 ，恢复其多巴胺的神经环路，是一种针对病因的 胶珠硬化后，生理盐水清洗 3遍，然后与 1．5％壳聚糖发生成膜 理想方法。有研究[2-33表明人视网膜色素上皮细胞(hRPE)作为 反应 (体积比1：8—1：5)，再次生理盐水清洗 3遍后，与 1．5g／L 供体细胞在帕金森细胞移植治疗中有可能发挥巨大潜能，然而 海藻酸钠溶液中和反应 (体积比1：8—1：5)，制成 ACA微胶囊， 直接移植这种细胞，可能因为受到受体的免疫杀伤 ，造成移植细 生理盐水清洗3遍。最后将制备好的ACA微胶囊用55mmoL／L 胞损害，从而导致移植失败。为了避免免疫排斥反应 ，借助微胶 的枸橼酸钠溶液液化微胶囊核心(体积 比1：8～1：5)，将囊核海 囊化技术可有效提高细胞移植后供体细胞的成活率。目前，应 藻酸钙 巾的Ca2进行置换，最终形成囊心为液体状态的ACA细 用最广泛的微胶囊制备技术有空气喷雾成囊法及高压静电成囊 胞微胶囊。 法。与气体喷雾法相 比较，静电微胶囊发生法制备的微胶囊直 微胶囊形态 、大小测定：显微镜下观察微胶囊形态，根据显 径较小，而且形状相对规则 ，大小较均匀，强度较高 ，生物相容性 微镜提供的刻度尺，测量微胶囊直径，共测定 1O个视野，取其平 更好L4J。我们用自制的静电微胶囊发生器制备人视网膜色素上 均值。 皮细胞海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠 (ACA)微胶囊，并且初步观察 微胶囊内细胞总数及存活率检测：将制备完成的ACA微胶 了在短时间内微胶囊内细胞的存活情况，现将结果报道如下。 囊用生理盐水清洗 2遍后加入上皮细胞培养液 中培养，分别在 一 、 材料和方法 当天、第 1天、第3天和第7天取出100个微胶囊放人离心管内， 1．试剂：hRPE细胞、上皮细胞培养基 (ScienCell公司)，海 生理盐水洗涤后加入0．01mol／LNaOH溶