免疫酶法测定桔霉素.doc

免疫酶法测定桔霉素 摘要：一种快速测定饲料当中的桔霉素乙腈水试验样品桔霉素μg/kg，相对重复性（精密度）和实验室中等精密度（重复性）的分析结果分别为0.11和0.16。 桔霉素[（3R,4S)-4,6-二氢-8-羟基-3,4,5-三甲基-6-羰-3氢-2-苯吡-7-羧酸]是青霉、曲霉和红曲霉等丝状霉菌代谢产生的一种毒素，这类霉菌主要污染饲料和谷类食品。这种化合物在商业上被称为“红曲”，谷物饲料和配合的饲料是主要的被污染物。免疫化学检测技术的发展Vrabcheva等人进行的第一次大规模工作的目的是开发一个快速的方法测定各种饲料-557（日本日立公司），进行酶联免疫吸附试验使用的聚苯乙烯板（第9018号;联合，美国）和AKI-TS-01（俄罗斯），IFA-OEP-A（俄罗斯），Dynatec公司的MR-250（德国）光度计。 活性酯法和甲醛缩合自发结合的条件下二甲基甲酰胺溶液100，200，和300μL1230，2460， 3690μ摩尔30?33°C并不断搅拌24h。然后透析三个1000体积0.2％的氯化钠溶液。用紫外吸收光谱法测定溶液的抗原表位密度（每摩尔的半抗原载体蛋白的摩尔数）（λ= 333 nm处的摩尔吸收系数6000） 牛血清白蛋白结合物，能与286倍摩尔质量毒素蛋白合成牛血清白蛋白 (286)，与葡萄糖氧化酶（400）经甲醛缩合后用于动物免疫接种。雄性灰兔（2?3公斤）弗氏完全佐剂合物饲料混合物、 添加剂、 和浓缩） 谷物产品（米糠和面筋）葵花粕，和葵花油被选为试验材料50毫升乙腈和水体积比为6：1混合批量提取准确性重复性精度）中精密度（重复性）GOSTRISO 5725-2002.。在粮食、饲料混合物、玉米蛋白等中加入20，100，和500μg/kg的桔霉素进行实验评价。由于测定的时间不同，操作者不同，以及仪器误差，测定被污染的样品当中桔霉素的含量，来确定其中等精密度特性。 结果与讨论 免疫试剂的制备。使用活性酯法桔霉素与，，和明胶结合据此前报道桔霉素特别是羧甲氧基胺氨基苯甲醛肼琥珀或戊二酸酐氢化铝锂C14位羧基ε-氨二环己基碳二亚胺赖氨酸残基毒素葡萄糖氧化酶偶联物血蓝蛋白抗桔霉素然而，在这种情况下，半抗原负荷约3。°C.下培养24h.该方法是通过分光光法证明结合物中毒素的存在（图1）。结合物具有半抗原桔霉素桔霉素（8-400倍））几乎相等酶联免疫吸附能力。桔霉素酶联免疫吸附试验程序的优化。固化的结合物异源桔霉素这两种类型的抗体对其他霉菌毒素伏马菌素桔霉素图3显示了桔霉素校准曲线图它显示了平均（N?=?40）率桔霉素的浓度对数图该抗体结合的百分比实验室条件下的外部因素，所有类型的测试材料桔霉素伏马菌素（94–111和94–103%）几乎相等的平均值101和100%不但没有干扰的试验化合物，而且抗体的特异性高，桔霉素乙腈水溶液十倍稀释的提取物校准的线性部分对应样本中毒素的分析范围 20 500 mg/kg。葵花粕，桔霉素）