破骨细胞血系起源的活细胞成像观察.pdfVIP

中国骨伤 2012年 4月第 25卷第 4期 ChinaJOrthopTrauma，Apr．2012，Vo1．25，No．4 · 317 · · 基 础 研 究 · 破骨细胞血系起源的活细胞成像观察 俞索静，肖鲁伟 ，吴承亮，童培建 (浙江中医药大学骨伤研究所 ，浙江 杭州 310053) 【摘要】 目的：采用活细胞成像技术，观察血系单核细胞诱导形成破骨细胞的全过程 ，旨在进一步阐明破骨细胞 血系起源的发生及其细胞动力学。方法 ：取成年 SPF级纯种雄性 SD大鼠 1只，体重 280g，腹主动脉采血 8ml，经密度 梯度离心分离单个核细胞 ，在 RANKL与 M—CSF诱导下，分为倒置相差显微镜观察组、抗酒石酸酸性磷酸酶染色组、 噬骨试验扫描 电镜观察组、活细胞成像组4组进行培养。倒置相差显微镜观察组从培养开始，在数字显微成像系统下， 每天观察记录 1次；抗酒石酸酸性磷酸酶染色组培养 21d作酶活性染色鉴定；噬骨试验扫描 电镜观察组培养 21d取 出骨磨片作扫描 电镜观察；活细胞成像组采用多点位缩时电影法对整个培养过程进行长达 35d的连续观察记录。结 果：诱导培养 2周后 ，倒置相差显微镜观察可见大量多核细胞形成 ，外形呈圆形、梭形、扇形、椭圆形及不规则突起状； 抗酒石酸酸性磷酸酶染色绝大部分多核细胞与单核细胞均呈阳性反应 ；骨磨片扫描 电镜观察可见较多骨吸收陷窝、坑 洼及沟道 ，还有位于陷窝及沟道 内正在行使骨吸收功能的破骨细胞 ；活细胞成像观察到起源于周 围血 的多核破骨细胞 是 由单核细胞 、单核细胞与多核细胞及 多核细胞之 间相互融合而成 ，其细胞 间的融舍均发生在贴壁状态，显微缩 时电 影观察显示破骨细胞形态表现复杂多变。结论 ：大鼠周 围血单核细胞在 RANKL和 M—CSF诱导下，可以向破骨细胞分 化 ，形成具有骨吸收功能的多核破骨细胞。破骨细胞 的形成是发生在贴壁状态下多种形式的细胞融合过程 ，破骨细胞 的粘附特性对其存活及功能发挥至关重要。破骨细胞具有吞噬功能，其形态结构动态多变。破骨细胞不仅是一种多核 细胞 ，还可能包括单核破骨细胞 。破骨细胞通过融合形成多核 巨细胞的特性，可能是其适应功能需求与骨吸收效率 的 一 种特殊生物学行为。实验结果进一步证实了破骨细胞的血系起源学说，并为深入 阐明破骨细胞 的细胞动力学与细胞 生物学特性提供 了新 的实验研究依据 。 【关键词】 破骨细胞 ； 起源； 活细胞成像； 血系； 外周血单核细胞 DOI：10．3969／j．issn．1003—0034．2012．04．015 Imagingobservationoflivecellsoriginatingfrom osteoclastsofthebloodsystem YUSuo-ring，X1A0Lu—wei， u Cheng—liang，TONGPei—册．InstituteofTraumatology Orthopaedics，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou 310053，Zhejiang，China ABSTRACT Objective：Tostudytheapplicationofthelivecellimagingmethodtoobservethewholeprocessofosteoelast formationinducedbymonocytemacrophagesinthebloodsystem inordertoclarifytheoriginofosteoclastsandtheircytody- nanfics．Methods：Bloodsamples(8m1)werecollectedfromtheabdominalaortaofmaleSDratsweighing280g．Mononuclear cellswereobtainedbydensitygradienteentrifugationandinducedbyRANKLandM—CSF．Thecellswereculturedanddivid— edintofourgroups：invertedphasecontrastmicroscope (IPCM)group，TRAPrgoup，SEM groupandlivecellimaging(LCI) grou