DNA甲基化对杆状病毒极早期与滞早期启动子转录活性的影响.pdfVIP

第 54卷 第 1期 复 旦 学 报 (自然科学版) Vo1．54No．】 2015年 2月 JournalofFudanUniversity(NaturalScience) Feb．2015 文章编号：0427—7104(2015)01—0016—06 DNA 甲基化对杆状病毒极早期和滞早期 启动子转录活性的影响 张 琦，徐博文，王 鑫，尹 隽，钟 江 (复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系，上海 200433) 摘 要：利用体外DNA甲基化酶和荧光素酶报告系统分析了DNA甲基化对杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角 体病毒 (Autographacalifomicamulticapsidnuc1eop0lyhedrovirus，AcMNPV)的8个极早期和滞早期基因启动 子表达活性的影响．研究结果表明，病毒极早期基因埘 和 e0启动子的活性受到甲基化修饰的强烈抑制，pe38 启动子活性受到部分抑制；同时滞早期启动子 ps5、DNApol、ze 、lef3和zP_厂8的启动子则在甲基化处理后得 到一定程度的激活．转染的同时用 AcMNPV感染细胞，在多数启动子中并没有改变甲基化处理对它们表达活 性的影响，但使其影响程度有所减弱．在另一些启动子(pe38， 5，lef1)中，AcMNPV的感染使甲基化的作用基 本消失．这些结果表明DNA 甲基化对一些杆状病毒启动子的转录活性有一定的调控作用． 关键词：杆状病毒；启动子；DNA甲基化 ；基因表达 中图分类号：Q786 文献标志码：A 杆状病毒(baculovirus)是一类双链DNA大型病毒，在基因工程表达生产蛋白质、害虫生物防治等方 面有广泛的应用，近年又发现它可以作为安全的哺乳动物细胞基因表达和基因治疗载体深受重视．目前 对AcMNPV的基因结构、功能和表达调节 已有较为全面的认识L1]，但 由于其基因组较大、宿主的遗传背 景复杂等原因，仍有许多方面需要深入探究．近年来，表观遗传学的兴起也引发了细胞组蛋 白乙酰化I2]、 DNA 甲基化机制对该病毒复制影响的研究．本实验室前期工作表明，在病毒复制过程中，某些基因启动 子区DNA 甲基化水平会随着复制时相而变化，而DNA甲基化可能影响病毒极早期基因 ieO／iel表达产 物对病毒基因表达的调控 j． 按照杆状病毒基因表达的时序，可以将其基因分为极早期、滞早期、晚期、极晚期 4类．其中极早期和 滞早期的基因主要是调控基因，它们的适时适量表达对病毒复制的正常进行具有重要作用．极早期基因 包括 ， ，ie2，pe38等．这些基因不需要其他病毒因子的作用就可以直接转录． 和 基因虽然从 不同启动子开始转录，但它们的表达产物 IE0与 IE1蛋白基本相同，前者只比后者在 N端多了54个氨基 酸．它们是最重要的病毒转录调节因子，能促进病毒极早期和滞早期基因的转录[4]．极早期基因pe38的 表达产物PE38带有锌指结构，同样具有转录激活作用_5]．滞早期基因有2O多个，主要为与病毒DNA复 制和晚期基因转录相关．其中， 5编码抗凋亡蛋 白，能抑制被感染细胞的凋亡[6]，DNApol编码DNA聚合 酶，是催化病毒DNA复制的关键酶[7]．1efs(1ateexpressionfactors)编码一批调节晚期基因表达或者涉及病毒 DNA复制的因子，zef／编码DNA引物酶，具有起始DNA复制的功能Ll8咖，Ida编码单链DNA结合蛋白，对 病毒DNA复制具有重要作用[1~11]，而 ／era编码的蛋白参与构成病毒特异的RNA聚合酶[1引． 鉴于病毒极早期和滞早期基因对病毒复制的必需作用，以及前期观察到的IE0和 IE1蛋 白对甲基化 和未甲基化的病毒启动子有不同的调节规律[3]，我们设想DNA 甲基化可能会影响更多病毒基因的表达， 并进而影响病毒的正常复制．本研究选择了3个极早期和 5个滞早期基因，构建了这些基因启动子的荧光 素酶报告质粒，通过瞬时转染和病毒共感染的方法，探讨 DNA 甲基化对这些重要基因启动子的转录活性 收稿 日期 ：2014—05—11 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目 作者简介：张 琦(1987一)，硕士研究生；钟 江，男 ，教授，