实验动物繁殖计划书范例 - 慈济大学实验动物中心.pdf

以下範例-感恩作者 (慈濟大學分子暨人類遺傳學系靖永皓老師)的分享與提供 ! 【實驗【實驗動物動 物繁殖計劃書範例繁殖計劃書範例】 】 【【實驗實驗動動 物物繁殖計劃書範例繁殖計劃書範例】】 Lu 7t Zbtb16 (C57BL/6)及 Zbtb16 (C3H/He)都是帶有 Zbtb16 基因變異的小鼠 。 Lu Zbtb16 突變鼠的表現型包括有後肢多趾症及公鼠不孕症 ，但 7t Zbtb16 只有後肢多趾症 的表現型 。 此計劃將使用不同年齡 、基因型的公鼠，收取其精巢，粹取RNA以進行轉錄特徵 的探討 。亦將建立一公二母的繁殖對，並每日檢察母鼠是否受精，以推算胚胎受 孕年齡 。之後用帝王切開法犧牲母鼠，取適當天數的胚胎進行原位雜交(in situ hybridization)，以了解某些基因產物(RNA 或 Protein)在胚胎肢芽脊的表達情 況。此實驗每一品系約將使用公鼠 10頭母鼠 50頭，兩個品系共 120 頭小鼠 。因 繁殖時所產生的小鼠其基因型無法控制 ，跟據孟德爾第二定律計算，約有25%的 小鼠其基因型為無實驗價值的wildtype，僅能供作對照組使用 。另外，母鼠有 時雖然受精卻不一定會受孕 。以此計算實驗所需約之小鼠胚胎隻數(一個品系 60 頭小鼠 ) 共400的總隻數 ，詳細計算如下: 每一個突變家族需要 l E13.5之heterozygote小鼠胚胎 50隻 (25隻用於 in situ hybridization；25隻用於 whole mount immuno-staining) l E13.5之homozygote小鼠胚胎 50隻(25隻用於 in situ hybridization；25隻用於 whole mount immuno-staining) l 六天大之heterozygote公鼠 18隻(用於microarray analysis) l 六天大之homozygote公鼠 18隻(用於 microarray analysis) 假設 :以平均每一胎有6隻胚胎計算 ，並考慮到約有40%母鼠雖然受精卻不 受孕 (60%的受精為有效懷孕)，以及 25%的小鼠其基因型為 wildtype 。 l 每一個突變家族實驗共需要的樣本數為:(50+50+18+18)=136隻 胚胎或幼鼠 。 l 25%的小鼠其基因型為 wildtype，因此需要收集 :136÷0.75=181 隻胚胎 l 平均每一胎有 6隻胚胎 ，因此需要:181÷6=30 次有效懷孕 。 l 60%的受精為有效懷孕 ，因此需要約 30÷0.6=50隻成熟 heterozygot母鼠 l 欲收集 50隻heterozygote成熟母鼠則需要生產 400隻成熟鼠 (heterozygote intercross matting約50%子代為 heterozygote；其中只有 50%為母鼠)。 10隻成熟 heterozygote公鼠亦由此 matting中產生 。 l 因此要建立 50隻heterozygote成熟母鼠繁殖對 ，所需之總動 物數為 ：400隻成熟鼠(包含各基因型及性別)。 本計劃探討因遺傳變異造成生長、發育的異常現象。不論是趾數的發育或是 精原母