基于操作的基本程序.pptVIP

启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片段，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片段，能终止mRNA的转录。 基因工程载体的构建需要考虑哪些因素 （1）基因的特点：如果一个来自动物的目的基因含有内含子，就不能用于转基因植物，因为动物中内含子的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物基因的内含子剪切掉，只能用该基因的cDNA。基因的产物如果是一个糖蛋白，那么该基因在原核生物细菌中表达出来的蛋白就可能不具备天然状态下的活性，因为糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加上的，而细菌无这些细胞器。 （2）要选择强启动子或组织特异性启动子。启动子有强有弱，选择强启动子可以增加转录活性，使基因产物量增多。如果希望基因在生物的某个组织表达，如只在植物种子中表达，就要选择种子中特异表达的启动子。 （3）要有选择作用的标记基因，如抗生素抗性基因，以便选择出真正的转基因生物。 （1）从基因文库中获取目的基因 ①什么叫基因文库？ 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 该方法是单子叶植物中常用的一种基因转化法，但是成本较高。 基因探针（DNA探针）与目的基因杂交，有无杂交带 检测程序 检测目的基因是否转录出了mRNA 提取受体生 物的mRNA 用同位素标记的 目的基因片段杂交 显 出 杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗原—抗体杂交技术 提取受体生 物的蛋白质 与相应抗体杂交 显 出 杂交带 （表明目的基因已形成蛋白质产品） 例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 各种大小的电泳仪 谱带 琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术，可用于分离，鉴定和纯化DNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下（如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等），有不同的迁移率，所以可通过电泳使其分离。凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭（EB）结合，在紫外灯下可看到荧光条带，籍此可分析实验结果。 1.下表关于基因工程中有关基因操作 的名词及对应的内容，正确的组合是 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 3.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B．有利于对目的基因是否导入进行检测 C．增加质粒分子的分子量 D．便于与外源基因连接 4. 有关基因工程的叙述正确的是 A．限制酶只在获得目的基因时才用 B．重组质粒的形成是在细胞内完成的 C．质粒都可作为运载体 D．蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 5.哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 6.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( ) A．基因枪法 B．显微注射法 C.农杆菌转化法 D．花粉管通道法 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如：cDNA文库） 基因组文库与部分基因文库的关系 ②基因文库的构建 A、基因组文库的构建 提取某生物 全部DNA 用适当 限制酶切割 许 多 DNA片段 与载体连接 导入受体菌群 该生物基 因组文库 （每个受体菌含有一段不同的DNA片段） B、cDNA文库的构建——mRNA反转录形成 目的基因的mRNA 逆转录酶 杂交双链 核酸酶H 使RNA降解 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) 与载体连接 导入受体菌群 该生物 cDNA文库 (包含了这种生物的所有基因） 部分基因可以 可以 物种间的基因交流 某种生物的全部基因 某种生物的部分基因 基因多少 有 无 基因中内含子（位于编码蛋白质序列内的非编码DNA片段） 有 无 基因中启动子（具有启动作用的DNA片段） 大 小 文库大小 基因组文库 cDNA 文库 文库类型 基因组DNA文库的构建 通过对受体菌的培养而储存基因