核基质MINT N端片段（365-1084aa）相互作用蛋白的筛选及鉴定.pdfVIP

aa)相互作用 N端片段(365-．1084 核基质MINT 蛋白的筛选及鉴定 硕士研究生 秦红 导 师 罗晓星教授韩骅教授 国家自然科学基金 本课题由： 资助。 国家高技术发展规划项目(001CB509906) 药理学教研室 医学遗传学与发育生物学教研室 摘 要 Notch基因编码的信号受体在调节无脊椎动物和脊椎动物的发育上起着 决定细胞命运分化方向的关键作用。Notch受体是异源二聚体，为跨膜信号 蛋白。胞外区结构包括信号肽、36个EGF(表皮生长因子)样重复序列和三个 ． | 2 鼻胃羊t太荦硕士季隹诗主 的胞内段取代了与Su(H)／RBP．JK／CBF～相结合转录阻遏复合物，并激活 蛋白是转录抑制复合物，作用于蛋白去乙酰化酶复合物，并通过抑制 1相互作用的机理 MINT与Su(H)／RBP·JK／CBF 究室～道建立了MINT的基因剔除小鼠并获得 初步表型分析见纯合子MINT突变小鼠胚胎在鬟 织病理学观察见纯合子突变胚胎有明显的中枢神经系统发育障碍，提示 MINT参与小鼠中枢神经系统的发育。MINT基因剔除小鼠获得成功后，我们 进而利用酵母双杂交的方法来筛选与MINT相互作用的蛋白质，鉴于 体中，以此为诱饵质粒从小鼠胚胎9天的cDNA文库筛选了与MINT-F2片段 相互作用的蛋白。经过营养筛选及B一半乳糖苷酶活性分析，结果筛选到了129 个阳性克隆a并提取质粒进行酶切鉴定，最后获得4个非重复克隆，对此4 个非重复克隆进行序列分析结果得出：它们分别是：层黏连蛋白受体I，2个 16S核糖体RNA和精氨酰-tRNA合成酶。 年四羊臣大学疆士手位语文 本研究筛出的2个16S核糖体RNA均为线粒体RNA，1个在线粒体膜上， 为同胎生哺乳动物的起源与分化有关的分子，其具体的作用机制还需迸一步 探讨；另一个在核内，为嵌合线粒体RNA，是16S线粒体RNA5’末端共价 连接～个120bp的反向重复序列，是转录后产物，可能是反式剪切后的结果， 广泛分布于鼠的精子、睾丸、肝、肾、脑和脾。本研究还筛出了1个精氨酰 ·tRNA合成酶，它的作用是将tRNA与精氨酸结合。另外还筛出了一个层黏 连蛋白受体l，为一个高亲和力的并高表达于各种肿瘤细胞表面(如白血病)的 蛋白受体，它同层黏连蛋白1结合后，改变层黏连蛋白l构型从而使其结构 域与肿瘤细胞分泌的特异的蛋白酶(主要是半胱氨酸蛋白酶组织蛋白酶B) 相结合，加快了层黏连蛋白I降解的速度并释放其蛋白水解的片段，从而加 快了肿瘤细胞的扩散。至于层黏连蛋白受体l同MINT-F2相互作用的机制还 需进一步探讨。 抑制分子，但它的转录抑制作用机制目前还不清楚，还需要进一步的研究。 本研究通过酵母双杂交的方法筛出的这4／个与MINT-F2相互作用的分子，为 进一步研究MINT的功能打下了基础。Y 》 杂交乙，瓤铺虹 ＼＼ 4 苎!!苎垄!!主!竺丝圭 MINT