实验染色体分带技术.ppt

实验11 染色体分带技术 一、实验目的 了解染色体分带技术的原理及应用 了解染色体G带和C带显示的原理 掌握染色体G带和C带显色技术流程 * * 二、实验原理 人们用物理、化学因素处理后，再用染料对染色体进行分化染色，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。染色体带型是鉴别染色体的重要依据。 * * 二、实验原理 G带是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后，再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带，是目前被广泛应用的一种带型。其特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一，有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区；相反，含GC多的染色体段则不易着色。也有人认为，Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。总的来说，G显带的机制还未搞清。 C带是染色体标本经强碱（NaOH或Ba(OH)2）热处理后，在着丝粒周围区域和异染色质区经Giemsa染成深色，而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法，主要显示着丝粒区和异染色质区的变化。 * * 二、实验原理 双翅目昆虫(果蝇、摇蚊等)幼虫期的唾腺细胞很大，其核内的染色体称为唾腺染色体。由于它们比普通染色体大100-150倍，宽约5μm，长约400μm，因而也称为巨大染色体。另外唾腺染色体经多次复制而不分开，所以又称作多线染色体。唾腺染色体经染色后出现深浅不同，疏密有别的横纹，且其数目和位置常常是恒定的，标志着物种的特征。 * * 三、实验仪器材料 洋葱、蚕豆、大蒜根尖 果蝇唾腺 1 N HCl溶液 Ba(OH)2溶液 Giemsa染液 显微镜 * * 四、实验步骤 * * 四、实验步骤 * * 唾腺呈半透明，球棒状，前端较细，后端粗钝，有时成对粘在一起成“V”字型，其外侧有时附有乳白或淡黄色的脂肪， 此时应保留唾腺形态的完整，因为食道和肠管也是半透明的，如果唾腺不完整，就很难判断唾腺和肠道的取弃。 四、实验步骤 * * 果蝇唾腺染色体制片 把唾腺剔出移到玻片的干净处，并清除其余器官和组织。如果唾腺上附有脂肪，应把乳白色或淡黄色的脂肪清除干净，保留半透明的唾腺。 把多余的生理盐水用吸水纸吸干，加一滴 1 N盐酸；室温下水解2分钟，然后吸干。 空气干燥一周 四、实验步骤 * * 植物根尖染色体制片 前处理：根尖用0.1%秋水仙素溶液处理4～12小时。 固定： 用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液固定2-24小时，换入70%酒精保存。 解离： 取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1N HCl中60℃解离 8～10min，再用蒸馏水洗净。 低渗： 倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后在蒸馏水中浸泡30 min。 后固定: 取出材料于载片，滴加新鲜Carnoy固定液，固定10-30 min 涂片：用镊子将材料捣碎，边捣边加固定液，去掉大块残渣。 空气干燥一周 四、实验步骤 * * G带显色 （1）将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。 （2）放入预温至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。 （3）在Giemsa 染液中染色10min，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。 （4）镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析 四、实验步骤 * * 四、实验步骤 1. 制片、烤片同G显带技术（65℃，2小时）。 2. 染色体标本在室温下用0.1 N HCl水解15分钟后蒸馏水冲洗。 3. 2% Ba(OH)2，65℃处理10分钟后蒸馏水冲洗。 4. 2×SSC，65℃处理1小时。 5. 冲洗冷却后用1：10 Giemsa稀释液染色7分钟。 6. 冲洗后晾干，镜检。 C带显色 * * 五、实验结果 G带显色 * * 五、实验结果 C带显色 * * 唾腺染色体显色 五、实验结果 * * 六、思考题 染色体显带有哪些技术？ 染色体显G带的关键步骤是什么？ 染色体显C带的关键步骤是什么？ * *