移植骨髓间充质干细胞在肝细胞癌中的分布及其趋癌性研究.pdfVIP

◇ 中^尢晕 移植骨髓间充质干细胞在肝细胞癌中的分布及其趋痛性研究 摘要 背景：肝细胞癌(HCC)是一种恶性程度很高的肿瘤，常见的手术、放疗、化疗等治疗手 段取得的效果有限，患者的预后很差。通过病毒或脂质体等将一些杀灭肿瘤的基因转导入肿 瘤细胞．可以在某种程度上达到抑制或杀灭肿瘤细胞的作用，因此，基因治疗方法在肿瘤的 治疗中显示了诱人的前景。但是，常用的载体如病毒或脂质体都一定的缺陷。病毒载体只能 瞬时表达，腺病毒载体还会激活宿主免疫系统，因此不能重复用药，而脂质体则转染效率低 下。近年的研究发现干细胞具有自我复制的能力，体外可以实现高效转染，并可通过筛选获 得稳定表达的细胞群体，有望成为新的基因治疗的载体。在各种于细胞中，骨髓间充质于细 胞(bMSCs)具有容易获得，扩增能力强，体外操作容易，低免疫原性等特性，有望成为一 种理想的载体。那么，骨髓间充质干细胞能否用作肝细胞癌的基因治疗的载体呢?为此，我 们研究了间充质干细胞在肝癌组织中的存活、分布及其对肝癌转移组织的趋化性。 目的：研究间充质干细胞在皮下肝癌组织中的分布及对肝细胞癌肺转移组织的趋向性， 为肝细胞癌的靶向性治疗寻找一种合适的载体。 方法：取SD大鼠双侧股骨，冲洗骨髓腔，冲洗液加入含等体积的淋巴细胞分离液 导其向成骨和成脂肪细胞分化，并用vonKossa法染钙化结节和油红染脂肪细胞加以鉴定。 将上述经过鉴定的问充质干细胞在体外用hoechst33342标记，取标记后的2×107个MSCs 和相同数目的HCC细胞混合注射到昆明小鼠的腋窝皮下，造成混合细胞肿瘤模型。于第7d或 第14d取皮下肿瘤，冰冻切片，荧光显微镜下观察MSCs在肝癌组织中的分布。为显示肿瘤内 的廊管和成血管的微环境，用免疫荧光组织化学的方法检测了肿瘤内的vWF和VEGF的表达， 并从mRNA水平检测了肿瘤组织的VEGF的表达。 在注射后7d或14d取材，将肺部标本做冰冻切片，片厚10啪，荧光显微镜下观察移植的细 胞在肺转移模型中的分布，并计数试验组和对照组阳性细胞数／高倍视野，结果做独立样本T Ⅱ ◇ 中^太睾 移植骨髓间充质十细胞在肝细胞癌中的分布及其趋癌性研究 检验。 结果：经淋巴细胞分离液分离后可见在两液面交界处有一白色的细胞层，为单个核细胞 富集层，取此层细胞接种后2d可见梭形细胞贴壁，第9d左右可以传代，传至3—4代时细胞 己较均一。免疫荧光细胞化学显示其表面标志呈CD44阳性，vWF阴性。在成骨诱导条件培养 基作用下，PO和P3代MSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化。 在肝癌皮下模型中，大多标记阳性细胞分布在肿瘤组织与正常组织的交界处，分布于肿 瘤组织中的标记阳性细胞数约占总的标记阳性细胞数的6％。分布在肿瘤组织中央的标记阳性 细胞形成了许多管腔样的结构，但是这种结构的性质尚未确定。免疫荧光组织化学的方法发 现少量标记阳性的细胞位于vWF免疫荧光阳性血管壁，初步证实MSCs不仅能在肝癌组织中生 存，还参与形成了肝癌间质的血管。为探讨MSCs分化的机制，我们分别用免疫组织荧光化学 和RT—PCR的方法，对肝癌皮下模型的中央和周边组织VEGF的表达进行了定性和定量检测， 发现肿瘤中央组织VEGF表达阳性，而周边组织则不表达。推测MSCs可能是在肿瘤所分泌的 一些成血管因子(如VEGF)的作用下向血管内皮分化。 在肝癌肺转移模型中，对照组的肺组织切片在荧光显微镜下可见极少量的移植的细胞， 阳性细胞位于肿瘤边缘，在14d实验组有较多标记阳性细胞位于肿瘤组织边缘。通过计数分 组标记阳性细胞数／高倍视野多于7d实验组(P0．05)。可见，肝癌肺转移组织似乎更加适合 间充质干细胞的生存，随时间延长分布于肝癌肺转移组织的阳性细胞数增多，证实了其对肝 癌组织的趋向性(tropism)。 综上，可以得出以下结论： l、在肝癌皮下和肺转移模型中，间充质干细胞可以在癌组织中较长时间生存； 2、间充质干细胞能分化成血管内皮细胞参与形成肝癌组织的间质； 3、间充质干细胞对肝癌肺转移组织具有趋向性，有望作为肝细胞癌基因治疗的载体。 关键词：间充质干细胞；肝细胞癌；肺转移；迁移； 血管内皮生长因子 Ⅲ 中生冬牵