GB/T 19200-2003猪水泡病诊断技术.pdf

ICs 11.220 B 41 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T 19200-2003 猪水泡病诊 断技术 Diagnostictechniquesforsw ni e vesiculardisease 2003-06-17发布 2003-12-01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量监督检验检 疫 总局 标准分享网 免费下载 GB/T 19200-2003 月组 舀 猪水泡病(Swine Vesicular Disease，简称SVD)是猪的一种烈性传染病，被世界动物卫生组织 [World Organization for Animal Health(英),Office International des Epizooties(法)，OIE]列为A类 疾病，我国将其列为一类动物疫病。本病主要在猪的蹄踵、蹄冠、唇、舌、鼻及乳头部引起水泡，临床症状 与猪口蹄疫(Foot and Mouth Disease，简称FMD)相似。 本标准提出的实验室方法主要是以世界动物卫生组织(OIE) K哺乳动物、禽、蜜蜂A和B类疾病 诊断试验和疫苗标准手册》为依据，并结合我国实际情况制定，其中“猪水泡病反向间接血凝试验”是我 国建立的方法。 本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E均为规范性附录。附录F为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国农业科学院兰州兽医研究所。 本标准主要起草人:张永光、牟克斌、王永录、刘西兰、方玉珍。 GB/T19200-2003 猪水泡病诊断技术 范围 本标准规定了猪水泡病病毒分离及鉴定，反向间接血凝试验(RIHA)、琼脂凝胶免疫扩散试验 (AGID)和病毒中和试验(VN)的技术要求。 本标准适用于猪水泡病的诊断。反向间接血凝试验和琼脂凝胶免疫扩散试验适用于大批样品筛选 试验，包括产地检疫、疫情监测、流行病学调查和无本病健康猪群的建立;病毒中和试验(VN)适用于诊 断和进出口猪检疫及抗体水平的评估。 2 病毒分离及鉴定 2.1 材料准备 2.1.1灭菌注射器，研钵。 2.1.2pH7.6,0.05mol/L的磷酸缓冲液(PB),pH7.6,50%的丙三醉磷酸缓冲液(GPB),pH7.2, 。.11mol/L的磷酸缓冲液(PB)，配制方法见附录A, 2.1.3 仔猪肾传代细胞((IB-RS-2)，乳鼠。 2.1.4 细胞培养液，见附录B, 2.2 样品的采集及处理 2.2.1水泡液:将水泡表面用75%酒精棉球消毒，用注射器抽取水泡液，直接放人灭菌小瓶中，加盖封 口，避光送至实验室，不做处理直接用于检测。 2.2.2 水泡皮:采集鼻镜、蹄部新鲜水泡皮，采集量为0.5g以上，放人预先加有pH7.6,50%的GPB 的灭菌瓶中，加盖封口，送至实验室。 2.3 细胞分离 2.3.1新鲜水泡液不做任何处理，可直接使用。当IB-RS-2长满单层细胞后，弃去培养液，加人水泡 液，以能淹没细胞单层为宜，于370C感作30min，然后补加4倍于水泡液的细胞培养液，置370C培养。 每天在倒置显微镜下观察2次，48h终判，若细胞培养液对照孔成立，分离病毒的细胞孔细胞出现变圆 乃至脱落，则视为细胞病变(CPE)判为阳性，若48h不出现CPE，则应冻融2次，再育传3代，不出现 CPE，判为阴性，出现CPE，则需做进一步鉴定。 2.3.2 水泡皮的分离，将水泡皮用pH7.2,0.11mol/LPB洗2次一3次，用灭菌滤纸吸去水分，称其 质量后置于加少量石英砂或玻璃砂的研钵中，按质量体积比(1:2)一(1:5)加人pH7.2,0.11mol/I. P