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* Content Layouts 生物制药技术 朱俊铭 2016-3-7 * 《生物制药技术（含实验）》课程教学大纲 * 教学内容 理论课学时 绪论 1 基因与工程细胞的构建 3 工程细胞的发酵培养与蛋白表达 2 重组蛋白的分离纯化 2 生物制药的制剂研究 1 生物制药的质量研究与分析技术 4 生物制药的中试研究 2 生物制药的稳定性研究 1 生物制药的主要药效学研究 1 生物制药的药代动力学研究 1 教学内容 理论课学时 小课讨论学时 生物制药的安全性评价 3 第一次PBL—生物制药立项 2 抗体药物 3 基因治疗与基因药物 2 肿瘤的细胞免疫治疗 3 第二次PBL—肿瘤的治疗 2 个体化医学诊疗 2 生物制药的知识产权问题 1 生物制药的药品注册 2 第三次PBL—生物制药申报 2 生物制药研发的基本流程 * 基因构建 发酵培养 分离纯化 制剂研究 质量研究 中 试 放 大 稳定性 研 究 药效学 研 究 安全药理研 究 临床申报 药学(实验室) 药学(中试) 药理学 临床试验 2.1 基因与工程细胞构建 2.2 工程细胞的发酵培养与蛋白表达 2.3 重组蛋白的分离纯化 2.4 生物制药的制剂研究 2.5 生物制药的质量研究与分析技术 2.6 生物制药的中试研究 2.7 生物制药的稳定性研究 第二章 重组蛋白药物的药学概论 原核细胞 真核细胞 * 2.1.1 基本概念 2.1.2 质粒、载体 2.1.3 工程细胞与细胞库 2.1.4 表达方式选择 2.1.5 基因构建与诱导表达 2.1.6 实例 2.1 基因与工程细胞构建 * 第二章 重组蛋白药物的药学概论 2.1 基因与工程细胞构建 基因重组——分子水平、提取、连接、转染、复制、表达 别称——基因工程、DNA重组、遗传工程、基因操作、克隆 工程细胞的三要素 基因 载体 宿主细胞 * 2.1.1 基本概念 基因——一段具有蛋白结构编码的核酸序列 载体——质粒、噬菌体、病毒 限制性内切酶、连接酶 抗生素抗性基因——Kan、Neo、Tet、Amp、Str 宿主细胞——细菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞 2.1 基因与工程细胞构建 * 2.1.1 基本概念 组建表达载体条件 强启动子 两侧的调控序列 选择标记 正确的读码框架 合适的核糖体结合位点（SD序列） SD序列与起始密码子ATG之间合适的距离 被翻译的蛋白性质与稳定性 合适的宿主细胞 2.1 基因与工程细胞构建 SD序列（Shine-Dalgarno sequence）：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。SD序列在细菌mRNA起始密码子AUG上游7-12个核苷酸处，有一段富含嘌呤的碱基序列，能与细菌16S rRNA3’端识别，帮助从起始AUG处开始翻译 * 2.1.1 基本概念 2.1.2 质粒、载体 2.1 基因与工程细胞构建 * 2.1 基因与工程细胞构建 * 2.1 基因与工程细胞构建 * 克 隆 鉴 定 宿主细胞 细胞筛选 细胞库 合成、分离、RT-PCR 优化、测序 抗性基因、限制性内切酶位点 宿主与产品的相关性 表达水平、产品鉴定 三级细胞库、遗传稳定性 载 体 2.1 基因与工程细胞构建 * 2.1.3 工程细胞与细胞库 原始种子库 主种子库 工作种子库 2.1 基因与工程细胞构建 * 调控 调控 生物遗传中心法则 DNA RNA Protein 2.1 基因与工程细胞构建 * 蛋白质结构 Primary Structure —— The sequence of amino acids on the polypeptide chain Secondary Structure —— Conformation of the polypeptide chain (3D structure) Tertiary Structure —— Three Dimensional Structure (Folding) of the protein Quaternary Structure —— Complexation with other proteins (Similar or dissimilar structures) 2.1 基因与工程细胞构建 * 2.1.4 表达方式选择 依赖于制备过程的蛋白质结构 Prokaryotic cells Easier to make Cheaper to produce Improper folding of protein