玉女煎对GK大鼠胰岛自噬基因Beclin表达的影响.pdfVIP

福建中医药大学学报 2012年 4月 第22卷 第 2期 32 JournalofFujianUniversityofTCM April2012，22(2) 玉女煎对 GK大鼠胰岛自噬基因Beclin表达的影响 何才姑 ，钱长晖，黄玉梅 ，郑雪花 ，蒋艺燕，施 红 (福建 中医药大学 中西医结合学院，福建 福州 350122) 摘要 ： 目的 探讨滋 阴清热 的玉女煎治疗 自发性 2型糖尿病 GK大 鼠胰 岛 自噬基 因Bec1in表 达的变化 。 方法 GK大鼠分为模型对照组和观察组 ，同品系的wistar大鼠作正常对 照组 ：观察组 用玉女煎灌 胃，另2个对照组用生理盐水灌 胃，每天 1次，连续4周。取胰腺 ，用免疫组化方法检测胰 岛自噬基因Beclin的表达；电子显微镜观察胰岛B细胞 自噬的形态学变化。 结果 玉女煎组胰岛 自噬基 因Beclin的表达和 GK对照组相 比显著降低 。而和 Wistar大鼠正常对照组之间没有显著差 异 ；电镜下可见对照组 GK大鼠胰 岛B细胞 内有较多的 自噬体 。 结论 自噬参与了2型糖尿病的 病理生理过程 ，玉女煎可降低胰岛B细胞 自噬基 因Beclin的表达 。 关键词 ：玉女煎 ；胰 岛细胞 ：自噬：滋阴清热：GK大鼠 中图分类号 ：R285．5 文献标志码 ：A 文章编号 ：1004—5627(2012)02—0032—04 自噬 (autophagy)普遍存在于真核细胞 ，在细 煎按成年人 (6O )每 日剂量为 ：石膏 15g，熟地 胞正常生理情况下参与降解 自身衰老的胞质和细 黄 30g，麦冬 6g，知母 4．5g，牛膝 4．5g。大 鼠按 胞器 ．在维持细胞内环境稳定方面起着重要 的作 成人每公斤体重用药量 的6倍给药 ．则每公斤大 用。自噬异常与多种疾病有关。玉女煎出 自《景岳 鼠每天 的药量分别为 ：石膏 1．5g，熟地黄 3g，麦冬 全书》，功效清热滋 阴，临床上用玉女煎加减治疗 0．6g，知母 0．45g，牛膝 0．45g，连续灌 胃4周。 2型糖尿病 (T2DM)取得很好 的疗效 。动物实验证 1．2．2 免疫组化检测胰岛Beclin蛋 白的表达 明玉女煎对糖尿病小 鼠有降血糖、血脂和改善血 1％戊 巴比妥腹腔麻醉 (40mg／kg)，处死动物 ，取 管作用 。但是玉女煎治疗糖尿病的机制并未阐明， 胰尾 ，置于4％多聚甲醛中固定、脱水 、包埋 、切片 ， 本实验从 自噬角度探讨其治疗机制。 按常规免疫组化 SP法染色，用兔抗鼠多克隆An． 1 材料与方法 ti—Beclin抗体作为一抗 (稀释 1：400)，加相应二 1．1 材料 抗 ，DAB显色 ，苏木精轻度复染。每组做 阴性对照 。 1．1．1 实验动物 SPF级 GK大鼠 (雄性)16只， 每张切片染色后在尼康 55i显微镜下观察所有胰 16周龄 ，体重 180~220g，SPF级 Wistar大 鼠(雄 岛并拍照，拍照用 1270万彩色数字 CCD，拍照前 性)8只，16周龄 ，体重 180~220g，购 自上海斯莱 做 白光校正 ，相同放大倍数 的照片光强度 、曝光时 克实验动物有限责任公司，许可证号 ：SCXK(沪) 间和亮度均相同。用免疫组化分析软件 ipp6．0测 2007—0005。合格证号 ：0063771。 定每个标本所有胰岛的累积光密度值 IOD和有效 1．1．2 主要试剂 兔抗 鼠多克隆 Anti—Beclin抗 面积 ．计算 出IOD／面积的比值 ，此 比值 即为平均 体 (Sigma公司)，酶标二抗 、DAB显色液等免疫组 光密度