微波消解――凯式定氮法在大豆蛋白质含量测定中应用.docVIP

微波消解――凯式定氮法在大豆蛋白质含量测定中应用摘要：建立微波消解―凯式定氮法测定大豆中蛋白质含量的方法，采用密闭微波消解样品，优化微波消解条件。方法的相对标准偏差RSD为1.75%，回收率在99.2-102.2%之间。分析结构与国标对照物显著性差异。该法具有消化时间短、环境污染小等特点，为快速测定大豆蛋白含量、以及改善操作人员工作环境，提供了参考。 关键词：大豆；蛋白质；凯式定氮法；微波消解 中图分类号：TS207 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-03-0095-2 2009年实施的新版大豆标准中，首次提出高蛋白质大豆的概念。这就需要制油企业在大豆收购现场，能够对大豆的蛋白质含量做出快速、准确的判断。凯式定氮法是测定大豆蛋白质含量的国家标准方法。但是凯式定氮法存在消解时间长，使用消解溶剂用量大，易造成环境污染，大量的酸雾易对操作人员产生伤害等问题。而采用微波消解试样，具有操作简便、消解速度快、所需消解溶剂少、消解能力强、改善操作条件等优点[1]。本文采用微波消解法代替凯式定氮法中的消化方式，减少了试剂用量，缩短了消解时间。试验表明，该测定方法与传统的凯式定氮法无显著性差异，适用于大批量蛋白质含量的测定。 1 材料与方法 1.1 仪器 MDS-2002A 微机控压密闭微波消解仪，上海新仪微波化学科技有限公司；DV-600联体微波消解罐；电子天平；凯式定氮蒸馏装置。 1.2 材料与主要试剂 高蛋白质大豆：东农42、吉林26、吉林28；硫酸，分析纯；过氧化氢（30%），分析纯；硫酸铵，分析纯；氢氧化钠溶液（400g/L）；硼酸溶液（20g/L）；盐酸标准溶液（0.05mol/L）；甲基红―溴甲酚氯混合指示剂（1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚氯乙醇溶液临用时混合）。 1.3 水分的测定 准确秤取大豆样品2.5g（精确至0.001g），按照GB/T5497方法进行测定，三次平行测定的平均值见表1。用格鲁布布斯法对测定数据进行可疑值的检验后，RSD在0.22-0.49%之间。 表1 大豆水分测定的平均值 　 1.4 方法 1.4.1 样品的制备 将黄豆豆渣平铺于玻璃皿上，置于恒温干燥箱中，于105℃下烘2h，磨碎过40目筛，置于干燥器中备用。 1.4.2 样品的消化 准确秤取已干燥的大豆粉试样0.2g（精确至0.001g）于消解罐中，加入浓硫酸5mL和双氧水1.5mL，轻摇，静置2min，旋紧密封盖，按表2设定的程序和参数进行消解[2]。同时做空白试验。消解完毕，取出消解罐冷却后，将消解液置于50mL容量瓶中，定容，摇匀。 1.4.3 样品的测定 取10mL消化好的样品溶液进行凯式定氮蒸馏，加入10mL40%的氢氧化钠溶液，使蒸流器内的内容物变棕色为止，馏出液用0.100mol/L的盐酸标准溶液滴定，吸收液颜色由蓝色变为紫红色为滴定终点，计算蛋白质含量。 粗蛋白质（以质量分数计/干 基）= 式中：V1为滴定试样时所需标准盐酸溶液体积，mL；V0为滴定空白时所需标准盐酸溶液体积，mL；c为所用盐酸标准溶液浓度，mol/L；m为试样质量，g；V为试样分解液总体积，mL，V2为实验分解液蒸馏用体积，mL；0.0140为与盐酸标准溶液相当的、以克表示的氮的质量，g；5.71是氮换算成蛋白质的系数（大豆）；W为试样的含水量，%。 表2 微波压力消解参数设定 2 结果与讨论 2.1 微波消解 微波消解是近年来产生的一种崭新的样品处理技术，它结合了高压消解和微波快速加热两方面的性能[3]。微波加热是“内加热”，具有加热速度快、加热均匀、无温度梯度、无滞后效应等特点[4]。快速高效，十几分钟即可将样品彻底分解，大大缩短了传统酸消化的时间，提高了工作效率。消化在密闭状态下进行，试剂无挥发损失，可保证反应的平行性和重复性。降低了试剂的用量，一般只需溶剂5-10mL。减少了劳动强度，改善了操作环境，避免了有害气体排放对环境造成的污染。密闭消化避免了易挥发组分的损失，同时也降低了环境对试样的氧化作用。 2.2 两种消解方法的比较 分别采用国标法和微波消解―凯式定氮法测定大豆中蛋白质含量，蛋白质含量测定结果见表3。 表3 两种不同消解方法蛋白质测定结果 由表3数据，用t检验法和F检验法检验，两种方法之间没有显著性差异(P 1