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Synthesis of caffeic acid molecularly imprinted polymer microspheres andhigh-performance liquid chromatography evaluation of their sorption properties 咖啡酸分子印迹聚合物微球体合成及吸附性能的高压液相色谱评估 咖啡酸的研究意义 广谱的抑菌作用 抗病毒 抗蛇毒 抗氧化 止血等药理作用 试验设计 试验方法 1、试剂预处理 二乙烯苯-80（DVB-80）和4-乙烯吡啶（4-VP）过活化中性氧化铝柱消除抑制； 偶氮二异丁腈（AIBN）在甲醇条件下低温重结晶； 相应原液（10mM），乙腈溶解，黑暗条件下40C下保存备用，使用前用乙腈稀释。 2、分子印迹聚合物聚合微球合成 2、分子印迹聚合物聚合微球合成 合成条件（条件不同合成的微球大小不同）： CA (0.12g,0.66mmol) 4-VP (0.28g, 2.65mmol) DVB-80 (1.72g, 13.23mmol) AIBN (0.09g, 0.58mmol) 合成过程： 混合液去氧充氮气10min 冰浴冷却 氮气中密封瓶子 温控慢 速旋转聚合 真空过滤 10.2μm聚酰胺纤维膜分离微球 甲醇 去除模板分子和未反应的功能单体 真空干燥 称重 3、形态特征观察 4、吸附特性表征 吸附等温曲线：是指在一定温度下溶质分子在两相界面上进行的吸附过程达到平衡时它们在两相中浓度之间的关系曲线 。 过程（三次重复）： 1、MIP、NIP各10mg加入3mLCA（浓度0.5-10mM,乙腈为溶剂） 2、密封于10mL玻璃瓶中，室温，涡旋24h 3、离心，荧光检测上清液CA浓度 4、计算推导吸附等温线，是否符合费伦德利希吸附等温线模型 相关计算公式： 5、高压液相色谱评价 方法： 装柱：分子印迹聚合物装入HPLC色谱柱，空气推动液压泵，丙酮作为悬浮分散剂 洗杂：丙烯腈/乙酸（95：5），流速0.2mL/min 进样：标准液及八种结构类似物分别进样，以丙酮作为空白标记，274nm记录保留时间和峰面积 洗脱：两次进样之间用甲醇冲柱子5min，洗脱液平衡10min 5、高压液相色谱评价 结果与讨论：聚合物合成和物理形态特征 结果与讨论：MIP与NIP吸附特性 结果与讨论：MIP与NIP吸附特性 结果与讨论：聚合物高压液相色谱评价 结果与讨论：聚合物高压液相色谱评价 3.1最适色谱条件优化 流动相流速的选择 在0.5-3mL/min范围内，流速大小对保留系数的影响并不明显，综合考虑保留时间、峰形、试剂的用量等方面，优化流速为2mL/min 3.2聚合物吸附特异性验证 通过试验证明CA及其他八种结构类似物的保留时间（洗脱先后顺序）与酸性没有太大关系； 洗脱的先后顺序与分子结构，大小，形状相关 结果与讨论：聚合物高压液相色谱评价 结果与讨论：聚合物高压液相色谱评价 结果与讨论：聚合物高压液相色谱评价 结果与讨论：聚合物高压液相色谱评价 结果与讨论：苹果汁中咖啡酸含量分析 结果与讨论：苹果汁中咖啡酸含量分析 结论 沉淀聚合合成的CA分子印迹聚合物，为形状规则的聚合物微球 通过推导等温吸附线，亲和力分布等，证明CA MIP具有印迹现象和强的吸附性能 HPLC证实CA MIP具有特异性吸附性能，对CA的回收率比较高 沉淀聚合合成CA MIP 形态特征及粒径选择 吸附特性表征 高压液相色谱评价 苹果汁中CA分析 沉淀聚合 功能单体 模板分子 交联剂 致孔剂 诱发剂 4-VP CA 非共价交联 DVB-80 乙腈 甲苯 AIBN 沉淀聚合：生成的聚合物不溶于单体和溶剂，在聚合过程中形成的聚合物不断沉淀析出的聚合反应 溶于乙腈甲苯（75/25) 氮吸附孔隙率 测定法 1、比表面积 2、特定孔体积 形态 扫描电子显微镜 扫描电子显微图 B为结合浓度，C为游离浓度，am为拟合常数 N代表结合位点数量，K代表亲和常数 保留系数 印迹系数 选择系数 保留指数 K’=(tR-t0)/to IF=K’MIP/K’NIP α=K’template/K’analogue RI=αNIP/αMIP HPLC相关不同参数的计算公式，根据各项参数对HPLC进行条件优化 tR：分析物 保留时间 t0：空白标记 保留时间 K’MIP：MIP柱分析物 保留系数 K’NIP：NIP柱分析物保留系数 K’template： 模板保留系数 K’analogue： 分析物保留系