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ATP 生物荧光技术 在生物学领域中应用的研究进展 李瑜 田斌 （大连水产学院 生命科学与技术学院 辽宁大连 116023） 摘 要：ATP 生物荧光技术在生物学领域中的应用广泛：应用于微生物学、分子生物学、以 及细胞学等学科中。利用 ATP 生物荧光技术原理，可用于多种生物检测，解决一些其它分析 方法不能解决的问题。例如，根据 ATP 与荧光强度的线性关系，测定微生物释放出的 ATP 从而进行微生物定性定量的分析测定。以及荧光素酶作为发光标记在核酸领域中的应用。 关键词：ATP 生物荧光技术; 生物发光; 微生物检验; 发光标记; 基因突变 前言： ATP生物荧光检测是基于生物发光体系的发光机理所设计，生物体发光细 胞内具有特殊的发光物质——荧光素及荧光素酶，荧光素易被氧化，它在荧光素 酶催化下，由ATP激活，使之与氧结合，荧光素分子中的电子跃迁到高能级，处 于不稳定的激发态{(LuHAMP)，当电子跳回到低能级时，即发出荧光光子(Hr) 。 由于ATP能不断提供能量，因而荧光素分子不断地被激活，即可连续地发出荧光， ［ ， ］ 其荧光强度与ATP浓度在一定范围内成线性关系 1 2 ，通过用发光光度计，可以 -11 检测出待测液中ATP含量，该法灵敏度极高，可检测出 10ug样品中的 10 g ATP ［ ］ 含量。 3 ［ ］ 上述特性决定了荧光素酶与ATP能构成很好的生物传感器 4 ，用于多种生物检 测，可解决一些其它分析方法不能解决的问题。例如，在临床医学、法医学、环 境监测、制备广谱的酶联免疫试剂及生命科学研究(胞内机制的研究，抗体活性 ［ ］ 鉴定，宇宙生物学的研究) 。因此，深受世界各国的重视。 5 ［ ］ 一、生物发光体系 5 生物发光是发生在生物体内的化学发光现象。北美荧火虫体内的荧光素—荧 光素酶是最著名的生物发光体系。这个反应的发光机理已研究了近 40 年，但仍 有一些环节不清楚。一般认为是在ATP和Mg2+存在下，荧光素酶与荧光素结合生 成复合物，复合物在氧气作用下氧化生成一个过氧化物中间体，然后分解生成激 ， 发态的羟基荧光素而放出光子( 图 1)[6 7] 。反应中复合酶起到提高光发射强度和延 [8] 长发光时间的作用 。 ［ ］ 作用机理如下 9 ： 荧光素酶Mg2+ 荧光素+ATP+O ——————氧化荧光素+AMP+PPi+CO +h ν 2 2 化学反应方程式： 图 1 荧火虫荧光素 荧光素酶体系的发光反应机理 生物发光体系的特点是发光效率、灵敏度、选择性均非常高。例如，荧火虫 荧光素酶体系是已知生物和化学发光体系中发光效率最高的体系，发出黄绿光的 量子产率高达 0.88Einsteinmol[10] 。生物发光的高灵敏度和高选择性决定了它在分 -1-