水蛭提取液对人RPE细胞转分化影响及β-catenin信号通路调控初步的研究.pdf

中文摘要 目的 探讨水蛭提取液对成人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium ，RPE)细胞转 分化及与此有关的wnt/β-catenin 信号通路的影响。 方法 （1）采用消化培养法，对人视网膜色素上皮细胞进行体外传代培养。 （2 ）在前期实验的基础上选择 64mg/ml 浓度的水蛭提取液作为药物浓度，作 用于人视网膜色素上皮细胞6h、12h 和24h 后，进行人视网膜色素上皮细胞的NSE 和CK、GFAP 免疫染色，观察水蛭提取液对人视网膜色素上皮细胞的转分化的影响。 （3 ）选择64mg/ml 水蛭提取液，孵育体外培养的人视网膜色素上皮细胞，用 免疫化学染色法检测RPE 细胞β-catenin 蛋白的表达；在不同作用时间点(30min、 1h、2h 、6h 、12h 、24h) ，用RT-PCR,western-blot,分别从基因、蛋白水平探讨水蛭提 取液对hRPE 细胞β-catenin 的影响。 结果 （1）64mg/ml 水蛭提取液在作用于人RPE 细胞6h、12h 和24h 后，免疫组化染 色均可见NSE 阳性染色，并见阳性细胞有突触形成、空泡状核等神经上皮细胞形态 的改变。