不同方法对甘薯块根可溶性蛋白的提取效果 - 应用与环境生物学报.pdf

2014-04-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.00211 / Chin J Appl Environ Biol 2014 20 ( 2 ) : 211-216 应用与环境生物学报 ， 不同方法对甘薯块根可溶性蛋白的提取效果* 1 2** 2 3 雍 彬 姜玉松 樊汶樵 张义正 1四川师范大学生命科学学院 成都 610101 2重庆文理学院林学与生命科学学院 重庆 402168 3 四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室 成都 610064 2-DE TCA- 摘 要 为建立一套适宜甘薯块根蛋白质组学分析的双向电泳体系（ ），采用匀浆法、丙酮沉淀法、 丙酮沉淀 SDSDE 4 法和酚提取法来制备甘薯块根可溶性总蛋白，并分别通过蛋白质定量、 和 技术来评估这 种蛋白制备 . 0.5 g Bradford 1.6 mg 2.4 方法提取甘薯块根蛋白质的优劣 结果显示，每 鲜薯块根，经 方法测定蛋白质的得率分别为 、 mg 1.2 mg 1.9 mg. SDSM 20 × 103 、 、 的结果表明，匀浆法、丙酮法制备的蛋白质分离到的条带较少，且在约 r 处的储 TCA- M 20 × 103 藏蛋白含量较高； 丙酮法和酚提取法制备的蛋白质分离到的条带则明显多于前两种方法，且 r 处储藏蛋 . 2-DE 白的相对含量也明显减少 结果显示，匀浆法制备的蛋白质在进行双向电泳分析时，几乎不能完成聚焦过程，仅 在凝胶的碱性端出现少量的蛋白质斑点，丙酮法和TCA-丙酮法要优于匀浆法，但是蛋白质斑点数量仍然较少，酚提 取法提取的蛋白质在进行双向电泳时分离到的蛋白质斑点数最多，为 1 120个，且在凝胶上均匀分布，背景清晰. 综上 所述，酚提取法是适宜甘薯块根蛋白质双向电泳样品制备的最佳方法. 图5 参25