高粱热激蛋白(hsps) 的电泳分析与雄性不育性.pdf

遗 传 学 报， 13。）：266-276,1986 ActaCeneticaSinica 高粱热激蛋白 H（SPs）的电泳分析 与雄性不育性 张孔澎 黄 菲 李京京 （中国科学院遗传研究所，北京） 本文以高粱雄性不育系为材料进行了热激蛋白的研究。苗期单向电泳表明，保持系在热 激 (400c）过程中可溶性蛋白有24条带，对照(280V)22条，出现2条带差异，不育系在热激后 有33条带，比对照2s条多5条，且有4条加强带，共9条带产生差异。苗期双向电泳，不育系 在热激后比对照有 19点产生差异，保持系热激后与对照比较有6点产生差异。表明双向电 泳揭示了热激后蛋白质在分子量和电性方面有差异。花粉母细胞期幼穗的热激蛋白，不育系 对照可溶性蛋白仅有3条带，热激后有 11条，8条带有差异。保持系对照有 10条带，热激后 有15条，1条加强，共6条带有差异。 幼穗期不育系蛋白质突出的缺少 19kd以上的大分子 量的带。从个体发育看，不育系由苗期可溶性蛋白比保持系带数多，发育到花粉母细胞期比 保持系突出地减少，尤其是大分子量的蛋白带消失，热激后明显地增加了与可育的保持系相 同的蛋白成份，表明不育系有其特殊的基因调控。 目前在国际上对热激蛋白 h（eatshockproteins— HSPs）的研究已成为生物工程中 较为活跃而且是发展较快的课题之一，22年前 Ritossa发现果蝇染色体在热激后呈现膨 大 P（uffs）现象[147010年后，Tissieres研究了与染色体膨大有关的热激蛋白Ll87。近几年 来热激蛋白的研究迅速扩展到昆虫、鸟类、哺乳动物，大豆、烟草、玉米，以及大肠杆菌、粘 菌、酵母等方面，最近扩展到人s7「01982年在冷泉港实验室召开了第一次热激蛋白的国际 学术会以”，研究内容深人到分子水平，研究了生物对热激的反应，在不同热激温度、不同热 激时间、突然增温和逐渐增温条件下生物对热激的反应。研究了其功能与机制，热激蛋白 的基因，基因调控等。试验表明对热激蛋白的研究是了解生物的基因调节与表达的一种 有效手段t一“，，‘。 我们把热激蛋白的研究对象扩展到了植物雄性不育的材料。植物雄性不育材料的热 激反应更有其特殊的表现。19“年，我们从试验中发现了高粱雄性不育系 3（197A）在 自然条件下遇到40℃的高温而诱发其花药由雄性不育呈现为可育的现象LI.7。我们已探 明高粱雄性不育系不但在形态上有变化，而且其蛋白质、同工酶也有变化11［,21。近两年研 究在高温条件下呈现的热激蛋白，在热激条件下高粱雄性不育系由雄性不育转变为可育 与呈现热激蛋白有许多共同之处，试验结果表明，这两者可能存在着内在的联系。因此我 们用高粱雄性不育系为材料，进行了热激蛋白的研究，并探求两者之间的关系。现报道初 步的试验结果。 本文于1985年2月16日收到。 咚期 张孔脂等：高梁热激蛋白 H（SPs）的电泳分析与雄性不育性 267 材 料 与 方 法 一（）试验材料 高粱雄性不育系3197A （以下简称不育系），保持系3197B （以下 简称保持系）。 二（）热激处理 1．幼苗处理 取在280C温箱中水培5天的幼苗，于温箱中从28℃逐渐升温，每小 时升温30C，至40℃时恒温培养4小时。对照温度保持在280C。处理后，分别取处理和 对照幼苗于液氮中保存。 2．幼穗处理 取剑叶叶环高出第一真叶叶环48cm的植株，采用水培方式，于温 箱中从28℃逐渐升温，每小时升温60C，至46℃时恒温培养4小时。对照温度保持在 _280C。处理后，分别取处理和对照的幼穗置于液氮中保存。 三（）样品制备 幼苗材料除去根及胚乳，剥取幼穗，经镜检为花粉母细胞期。样品缓冲液按 Tripathi 等 ”〔‘的方法配制。每克材料加0.2ml样品缓冲液，用玻璃匀浆器匀浆。取匀浆液，在室温 下29000Xg离心 15分钟，取上清液保存于一20℃备用。 （四）电泳 1，等电聚焦聚丙烯酸胺凝胶柱状电泳 参照 P.H.OFatrell等人的方法5【,1