条斑紫菜蛋白酶解多肽的抑菌活性 - 渔业科学进展.pdf

第36 卷 第2 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.36, No.2 2 0 1 5 年 4 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr., 2015 DOI: 10.11758/yykxjz / 条斑紫菜蛋白酶解多肽的抑菌活性* ① 宋惠平 于 佳 李 钐 魏玉西 王文秀 许丽娜 韩 丹 (青岛大学生命科学学院 青岛 266071) 摘要 以条斑紫菜为原料，分别提取水溶、酸溶、碱溶、盐溶性蛋白质，并用6 种蛋白酶酶解，将所 得24 种酶解物采用琼脂孔穴扩散法对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、四联微球菌(Micrococcus tetragenus) 、枯草杆菌(Bacillus subtilis) 以及大肠杆菌(Escherichia coli) 4 种菌进行抑菌活性测定。结果显 示，水溶性胃蛋白酶酶解物的抑菌活性最优。将水溶性蛋白质经硫酸铵沉淀以及超滤分级，比较不同饱 和度硫酸铵沉淀所得蛋白质酶解物以及不同分子量多肽的抑菌效果。结果显示，水溶性蛋白在硫酸铵饱 和度为40% 、50% 时沉淀所得蛋白的胃蛋白酶酶解物中，相对分子质量小于5 kDa 的级分抑菌效果最为 明显。此外，对该级分进行了抑菌活性影响因素的初步研究，结果表明该级分热稳定性以及酸碱稳定性 均较好，有望开发为天然的食品防腐剂。 关键词 条斑紫菜；水溶性蛋白质；胃蛋白酶；多肽；金黄色葡萄球菌；抑菌活性 中图分类号 S985 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2015)02-0140-06 紫菜(Porphyra)属红藻门(Rhodophyta) 、红毛菜科 1 材料与方法 (Bangiacea) ，广泛分布于从寒带到亚热带的潮间带水 域(Niwa et al, 2009) 。条斑紫菜(Porphyra yezoensis) 1.1 材料与试剂 是我国重要的经济海藻之一。研究表明，条斑紫菜主 条斑紫菜购自江苏连云港，供试菌种：金黄色葡萄 要成分是蛋白质(含量高达 36.31%)和多糖(冯琛等, 球菌(Staphylococcus aureus) 、四联微球菌(Micrococcus 2004; 范晓等, 1993; 高淑清等, 2004) 。目前，国内外 tetragenus) 、枯草杆菌(Bacillus subtilis) 以及大肠杆菌 有关紫菜营养与活性功能的研究主要集中在紫菜多 (Escherichia coli)均由青岛大学生命科学学院微生物 糖，对于紫菜蛋白的关注相对较少(朱晓君等, 2008; 学实验室提供。胃蛋白酶为Solarbio 产品，活力单位 闫建忠等, 2005; 刘青梅等, 2005) 。 为800–2500 U/mg。 随着致病菌抗药性问题日益突出，寻找全新类 型的抗生素是解决抗药性问题的一条有效途径。由 1.2 主要仪器与设备 于目前已发现的抗菌肽存在资源有限、活性不足或 DXF-10A 型多功能摇摆式粉碎机(广州市大祥电 合成成本高等问题(刘石宝等, 2011; Li et al, 2013) ， 子机械设备有限公司) 、JY92-II 超声波细胞粉碎机(宁 部分抗菌肽具有抵抗胰蛋白酶或胃蛋白酶水解的能 波新芝科器研究所) 、GL-20G-II 高速冷冻离心机 力(刘静等, 2006) ，由特定酶降解蛋白质已明确成为 (Hitachi) 、Labscale 小型切向流超滤系统(Millipore) 、 生物活性肽的来源(Hend et al, 2012)。目前，国内外 Sartorius PB-10(赛多利斯科学仪器有限公司，北京) 、 对