hela细胞蛋白质分离和肽质量指纹谱鉴定方法的建立 - 首都医科大学.pdf

２００９年 ６月　　　　　 首 都 医 科 大 学 学 报 　　　Ｊｕｎ．２００９ 第３０卷　第３期　　　　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖｏｌ．３０　Ｎｏ．３ ［ｄｏｉ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６７７９５．２００９．０３．０１６］ ·基础研究 · Ｈｅｌａ细胞蛋白质分离和肽质量指纹谱鉴定方法的建立 １ ２ １，３ １ １ １，３ 胡　家　李燕英 　孙丽翠 　殷爱红 　武文琦 　贺俊崎 （１．首都医科大学医学实验与测试中心；２．北京理工大学附属医院；３．首都医科大学生物化学与分子生物学系） 【摘要】　目的　研究Ｈｅｌａ细胞总蛋白质的分离及利用肽质量指纹谱对蛋白质进行鉴定的方法。方法　提取了Ｈｅｌａ细胞的总 蛋白质，通过双向电泳技术对蛋白质进行了分离，并应用图像扫描仪及图像分析软件获取蛋白质点的数字化信息。对其中不同 丰度的蛋白质点，进行胶内酶切后，通过基质辅助激光解吸／电离直角型飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩＯＴＯＦＭＳ）分析，再将检测出的 多肽质量数通过Ｍａｓｃｏｔ搜索引擎检索ＮＣＢＩｎｒ数据库。结果　获得了Ｈｅｌａ细胞总蛋白质双向电泳图谱及蛋白质点的数字化信 息，通过ＭＡＬＤＩＯＴＯＦＭＳ检测得到的肽质量指纹谱再经过网上公共数据的检索从而获得３个蛋白质点分别是 葡萄糖苷酶 α （ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）、肌动蛋白（ａｃｔｉｎ）和过氧化物酶２（ｐｅｒｏｘｉｒｅｄｏｘｉｎ２）。结论　Ｈｅｌａ细胞总蛋白质双向电泳的分离效果较好，肽 α γ γ 质量指纹谱法能有效地对Ｈｅｌａ细胞的蛋白质斑点进行鉴定。 【关键词】　Ｈｅｌａ细胞；蛋白质组；２ＤＥ；ＭＡＬＤＩＯＴＯＦＭＳ；肽质量指纹图谱 【中图分类号】　Ｑ５０３ ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍＨｅｌａＣｅｌｌｓｂｙＴｗｏＤｉｍｅｎｓｉｏｎａｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎｄＰｅｐｔｉｄｅＭａｓｓＦｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ １ ２ １，３ １ １ １，３ ＨＵＪｉａ，ＬＩＹａｎｙｉｎｇ，ＳＵＮＬｉｃｕｉ ，ＹＩＮＡｉｈｏｎｇ，ＷＵＷｅｎｑｉ，ＨＥＪｕｎｑｉ （ １．ＭｅｄｉｃａｌＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｎｄＴｅｓｔＣｅｎｔｅｒ，ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；２．ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ； ３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） 【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎＨｅｌａｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍＨｅｌａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｉｓｏｌａｔｅｄｂｙｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（２ＤＥ）．Ｔｈｅｄｉｇｉｔａｌｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｐｏｔｓ ｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙａｓｃａｎｎｅｒａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｈｒｅｅｓｐｏｔｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｇｅｌｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｂｕｎｄａｎｃｅｗｅｒｅｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙａｎｉｎｇｅｌｅｎｚｙｍｅ ａｎｄｔｈｅｍａｓｓｅｓｏｆｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｍａｔｒｉｘａｓｓｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＭＡＬＤＩＯＴＯＦＭＳ）．Ｔｈｅｄａｔａｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｐｅｐｔｉｄｅｍａｓｓｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ