酶解反应和膜分离耦合制备乳源抗菌肽 - 江苏科技大学学报.pdf

第２４卷第４期 江苏科技大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．２４Ｎｏ．４ ２０１０年８月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ａｕｇ．２０１０ 酶解反应和膜分离耦合制备乳源抗菌肽 吴琼英，徐金玲 （江苏科技大学 生物与环境工程学院，江苏 镇江２１２０１８） 摘　要：采用间歇式酶膜反应工艺水解牛乳蛋白制备抗菌肽，以金黄色葡萄球菌做指示菌，考察了酶膜耦合时间、底物浓 度、加酶量、温度、ｐＨ值和出肽速率等因素对蛋白转化率的影响，并在单因素影响实验的基础上，通过正交实验进行工艺优 化．结果表明：间歇式酶膜反应的最优工艺参数为耦合时间１２０ｍｉｎ，底物浓度２％，加酶量３％，温度３０℃，ｐＨ７５，出肽速 率６ｍＬ／ｍｉｎ；在此优化条件下，蛋白转化率为０２９３％，牛乳蛋白酶解产物的最小抑菌浓度为４８ ｇ／ｍＬ．该法通过消除产 μ 物抑制效应，有效地避免多肽过度降解，从而提高产物活性，较好地强化了反应过程，为酶法制备乳源抗菌肽提供一种更有 效的方法． 关键词：乳蛋白；抗菌肽；间歇式酶膜反应；酶解 中图分类号：Ｑ８１４９　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１６７３－４８０７（２０１０）０４－０３８６－０５ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｂｙｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓａｎｄｍｅｍｂｒａｎｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｆｒｏｍｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎ ＷｕＱｉｏｎｇｙｉｎｇ，ＸｕＪｉｎｌｉｎｇ （ＳｃｈｏｏｌｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＺｈｅｎｊｉａｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１２０１８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｆｒｏｍｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎｂｙｂａｔｃｈｅｎｚｙｍｅｍｅｍｂｒａｎｅｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ ｃｏｕｐｌｉｎｇｔｉｍｅ，ｓｕｂｓｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｎｚｙｍｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｒａｔｉｏ，ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｐＨａｎｄｐｅｐｔｉｄｅｓｆｌｕｘｏｎ ｔｈｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｎｗｈｉｃｈＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｗａｓｕｓｅｄａｓｉｎｄｉｃａｔｏｒｂａｃｔｅｒｉａ，ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｏｐｔｉｍａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓｆｏｒｂａｔｃｈｅｎｚｙｍｅｍｅｍｂｒａｎｅｒｅａｃｔｉｏｎｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ． Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｃｏｕｐｌｉｎｇｔｉｍｅ１２０ｍｉｎ，ｓｕｂｓｔｒａｔｅｃｏｎ ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ２％，ｅｎｚｙｍｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｒａｔｉｏ３％，ｒｅａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ３０℃，ｐＨ７５ａｎｄｐｅｐｔｉｄｅｓｆｌｕｘ６ｍＬ／ｍｉｎ． Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｏｆｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎｉｓ０２９３％，ａｎｄｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａ ｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎｉｓ４８ ｇ／ｍＬａｇａｉｎｓｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ μ ａｌｓｏｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｃａｎｒｅｄｕｃｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆｐｒｏｄｕｃｔｓ，ａｎｄｏｖｅｒｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｐｅｐｔｉｄｅｉｓａｖｏｉｄｅｄ