定量蛋白质组学分析pkng 在分枝杆菌中的功能.pdf

中国科学: 生命科学 2014 年 第44 卷 第10 期: 1051 ~ 1060 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 中国知名大学及研究院所专栏 清华大学专辑 定量蛋白质组学分析PknG 在分枝杆菌中的功能 ① ① ① ② ③* ①* 陈宇凌 , 江晓勇 , 杨帆 , 王清涛 , 米凯霞 , 邓海腾 ① 清华大学生命科学学院, 北京 100084; ② 首都医科大学附属朝阳医院, 北京 100020; ③ 中国科学院微生物研究所, 北京 100101; * 联系人: dht@, mik@ 收稿日期: 2014-09-09; 接受日期: 2014-09-27 教育部自主科研基金(批注号: 2012Z02293)资助项目 doi: 10.1360/052014-141 摘要 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶 G(PknG)是分枝杆菌中一个类似于真核生物蛋白 关键词 激酶C 的蛋白质, 对结核分枝杆菌的生长和新陈代谢等生理过程, 以及结核分枝杆 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶G 分枝杆菌 菌的耐药和在宿主细胞中的存活都起着重要的调节作用. 本文在耻垢分枝杆菌 蛋白磷酸化修饰 (Mycobacterium smegmatis)mc2 155 中构建了过表达结核分枝杆菌PknG 的重组菌株 定量蛋白质组学 PknG-mc2 2 2 155, 并发现 PknG-mc 155 的生长速度慢于 mc 155. 应用化学修饰结合 LC-LC-MS/MS 的定量蛋白质组学方法, 在mc2 2 155 和PknG-mc 155 中鉴定到了176 种有差异表达的蛋白, 其中152 种蛋白在PknG-mc2 155 中表达下调, 24 种蛋白表达 上调. 这些差异表达的蛋白参与了多个细胞过程, 包括代谢、蛋白翻译等. 基于这 些结果，我们推测PknG-mc2 155 生长速度慢的原因是因为代谢相关酶如GlpK, ALD 和DesA1 等蛋白表达的下调; 而Ag85A, Ag85C, SecA2 等蛋白的上调则增强细菌的 感染性; 另外KatG 蛋白的下调提示PknG 的过表达增强了菌株的抗药性. 代谢组学 分析发现谷氨酸和谷氨酰胺在PknG-mc2 2 155 中的水平低于在mc 155 中水平, 证实 了PknG 影响谷氨酰胺的稳态平衡. 利用蛋白质磷酸化分析, 我们发现PknG 的苏氨 酸残基T-320 上有一个自磷酸化修饰, 而且在PknG-mc2 155 菌株中, 也鉴定到gltA 和glmM 上的磷酸化修饰, 显示gltA 和glmM 是PknG 的底物. 本研究为理解PknG 的功能和作用机制提供了新的依据和解释, 为深入研究PknG 在结核分枝杆菌中的 功能奠定了基础, 我们的结果也表明蛋白质组学技术是系统研究细菌蛋白质功能 的重要工具. 结核病是结核分枝杆菌引起的传染病. 据统计, 核病得以蔓延的主要原因之一. 对于结核分枝杆菌 2012 年全球共有约 860 万的新感染者和 120 万人死 在宿主