沙田柚s—rnase基因的克隆及序列分析 - open repository of .pdf

第 33卷 第 1期 广西师范大学学报 ：自然科学版 Vo1．33 No．1 2O15年 3月 JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEdition M ar．2O15 沙 田柚 S—RNase基因的克隆及序列分析 秦新 民 ，张 渝 ，刘玉洁 ，郭丹妮 ，李惠敏 (1．广西师范大学 生命科学学 院，广西 桂林 541004； 2．珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室 ，广西 桂林 541004) 摘 要 ：利用高通量测序技术对沙 田柚 自交和异交花柱进行转录组测序 。通过差异分析得到沙 田柚 S—RNase 基因序列 。该基因全长为 1238bp(GenBank登录号为KP172529)，开放阅读框 (ORF)全长为 834bp，共编码 278个氨基酸 ，编码 的蛋 白质的相对分子质量为 31．402kDa，理论等 电点为 5．30。S-RNase蛋 白为亲水性蛋 白，共有 17个可能的磷酸化位点。氨基酸序列分析表 明，其编码 的氨基 酸与柚 Citrusmaxima、沙糖桔 Citrusreticulata和甜橙Citrussinensis的同源性分别为99 、98 和 96 。系统进化树显示沙 田柚 S-RNase 基因与柚 、沙糖桔和甜橙亲缘关系很近 ，属于 同一进化分支 。 关键词 ：沙 田柚 ；S-RNsae基 因；序列分析 中图分类号：Q946 文献标志码 ：A 文章编号：1001—6600(2015)01-0139-07 0 引言 自交不亲和性 (self—incompatibility，SI)广泛存在于被子植物中。所谓 自交不亲和性是植物雌蕊的柱 头或花柱可以识别 自体或异体花粉 ，并抑制 自体花粉萌发或生长的一种特性 ，在被子植物的有性生殖过程 中，自交不亲和性对于避免近亲繁殖有很重要 的作用…1]。因此 ，阐明 自交不亲和性的分子机理在植物生殖 学和培育无籽品种等方面具有重要的理论和应用价值 。 近几年来 ，对于几种模式植物的分析 ，花粉一雌蕊相互作用 的过程 中牵涉到具体的分子机理越来越多 地被发现r2]，如调节有性繁殖尤其是花粉识别 、花粉管定向生长 以及亲和 ／不亲和反应的关键蛋白，表现出 了极端多样化 ¨3]。如茄科 】、蔷薇科_6。和玄参科植物_8等在雌蕊通过复等位基 因核糖核酸酶阻止不亲 和花粉管的生长 ，但一些非 s位点因子也参与了这个过程 [9]。此外 ，罂粟科植物在不亲和花粉管生长过程 中涉及了复杂的细胞反应 ，如钙通量n “]、肌动蛋 白重排_1]和程序性细胞死亡l】引，从而抑制了花粉管的 生长 。 沙田柚为芸香科植物 ，属配子体高度 自交不亲和果树 。目前 ，关于芸香科植物的 自交不亲和性机理尚 不明确 ，但沙 田柚在 自交不亲和的形态学、细胞学和蛋 白质化学等方面的研究取得了一定进展 ：确定了沙 田柚 自交不亲和性类型、花粉管在花柱中生长的受阻部位_1；采用 IEF／SDS—PAGE双向电泳的方法鉴定 出了沙田柚 自交花柱特异蛋白，并测定了该蛋白的相对分子质量 、等电点和 N一末端氨基酸序列l1“；秦新 民等 对沙田柚花粉管特异蛋 白进行 了分离和鉴定 ；同时，花柱通道细胞 中的特异蛋 白l】]和花粉管中的 特异蛋白的产生部位及分布也得到确定 [1 。为了探讨沙田柚 自交不亲和性 的机理 ，我们对沙田柚 自交 和异交花柱进行转录组测序 ，通过 自交和异交花柱差异基 因的比对 ，获得 了沙 田柚 S—RNase基 因，并对该 基 因编码的蛋 白质进行生物化学特征分析 ，旨在为深入研究沙 田柚 自交不亲和分子机理提供理论基础。 收稿 日期 ：2014一l1—24 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目；广西教育厅资助项 目项 目(2o13YB036) 通信联系人 ：秦新 民(1956一)，男 ，广西灵川人 ，广西师范大学教授 ，博士 。E—mail：xmqin@mailbox．gxnu．edu．cn 14O 广西师范大学学报：自然科学版 第 33卷