色谱柱对蛋白质和多肽的分析 - shodex.pdf

色谱柱对蛋白质和多肽的分析 目 录 Page １．序言- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 1 ２．HPLC 分离蛋白质、多肽 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 1 ３．各种分离模式- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 4 ３－１．尺寸排阻模式 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 4 ３－２．离子交换模式 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 8 （附录）缓冲液的种类- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 16 ３－３．反相模式- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 17 ３－４．疏水色谱模式 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 23 ３－５．亲和模式- - - - - - - -- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -24 ３－６．复合模式 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -34 1. 前言 蛋白质 ・多肽的分离精制技术在医药品、食品等领域中的运用必不可少，这其中高效液相色谱 仪 HPLC 发挥着非常重要的作用。主要应用的分离模式有尺寸排阻、反相、离子交换、疏水色谱、亲 和色谱这 5 类、而且还有尺寸排阻和反相（或离子交换）相结合的复合模式。本文首先对各种分离 模式进行介绍，然后再介绍所对应的 Shodex 色谱柱的专有技术和分析实例。 2. HPLC 对蛋白质 ・多肽的分离 建立分离精制计划，首先要明确对象试料的性质，然后选择最适合的分离模式。考虑选择什么 样的分离模式时，首先要分析一下试料的性质。 ①目的成分和其它成分的分子量相差很大时 → 选择尺寸排阻模式 ②目的成分和其它成分的等电点相差 1 以上时 → 离子交换模式 ③目的成分和其它成分的疏水性有差别时 → 反相模式、疏水性色谱模式 ④使用对目的成分有亲和作用的填充剂时 → 亲和模式 ⑤目的成分的 pＨ、盐浓度以及温度稳定性 以分析为目的时，参考上述的①～④分离模式进行选择一般就满足了。以制备为目的时，为避 免所要成分性质发生变化，就需要对第⑤项内容进行确认了。 通常几种分离模式组合起来进行逐步分离精制。图 1 表示了逐步分离的设计实例。未知样品的一次 筛选选用在一定时间内从大分子量到小分子量按顺序洗脱的 GFC 色谱柱。 图１：分离精制逐步实现的设计实例 离子交换模式