纯化AmFc-BmFc 新版本 2012.07.24.docVIP

一、 过滤 先将细胞发酵液通过3-0.8μm和0.45-0.2μm的过滤组合1、 将30.8μm和0.450.2μm的滤芯分别装入滤壳。3+0.8μm,sartoclean CA,5622504E1, 10英寸 代替上面的CA可以用SartopurePP2,10英寸更好,0.45+0.2μm ,sartopore2,5442507H1,10英寸 2、 3、 4、 二、 A-Mabselect SuReGE Healthcare）亲和层析 1、 2、 、 、 、 、、 、、pH3.5条件下灭活病毒Mustang Q: XT5MSTGQPM6(5ml XT CAPSULE MUSTANG Q) 5ml 囊式膜层析过滤器 PALL公司，可重复使用，百泰测试结果：5ml，处理8g，适用于实验室规模140ml处理20g，适用于中试，Mustang Q: XT140，货号：XT140MSTGQP05) 1. S8洗，25ml/min，流速小些 2. 1M NaCL+0.1M NaOH再生，流速小些 3. 缓冲液4平衡，流速可大些4. 上样，流速可大些 5. 缓冲液4平衡 5．S8清洗,20-30min 6. S17清洗 收集后，过滤 备注：Q阴离子交换sartobind Q ，这两个是阴离子交换膜，样子和滤器差不多，省时省力，很好用，可重复使用，回收效率也很高。使用时可以用咱们阴离子缓冲及洗脱液。 我会列出相关订货信息和使用说明（附件中）： Srtorius：Sartobind Q75 订货信息：93IEXQ42DB-12—V Mustang Q 5ml 订货信息：3. Pall Mustang Q: XT140，货号：XT140MSTGQP05 五、 SP阳离子交换GE） 1、用缓冲液5调节pH至5 2、用缓冲液6平衡，直至pH（PH5.0-5.5）和电导值（3.0-5.0）平衡，电导特别重要一定要调好调准。 3、上样 4、用缓冲液6平衡，直至pH和电导值平衡 5、用缓冲液7洗脱，收集吸收峰，收集后，过滤 6、用溶液10清洗 (2 M NaCl) 7、用溶液6/8清洗 (0.5 M 或1M NaOH) 8、用溶液7保存，直至电导值平衡 六、 sephadex G-25脱盐处理sephadex G-25脱盐处理Centricon Plus-70 离心超滤管UFC703008；如量少，可选用millipore,货号：UFC903008。第六步的全部过程也可以用超滤。超滤装置可以用pall,sartorius等公司，pall公司的超滤装置：FS010K10（未带泵，商谈后可以送膜包），价钱3万左右，超滤缓冲液可以用制剂溶液配方或各缓冲液溶液名称 药品名称 pH 缓冲液1 (50 mM Tris, 150 mM NaCl) Tris-氯化钠 7.3～7.5 15 20mS/cm 缓冲液2 (50 mM Tris, 500 mM NaCl) Tris-氯化钠 7.3～7.5 40 60mS/cm 缓冲液3 (0.1 M 柠檬酸) 无水柠檬酸 3.～3.8 3 6mS/cm 缓冲液4 (0 mM Tris) Tris，Hcl 7.6-8.0 0.9 ～1. 5mS/cm 缓冲液5 (2 M 醋酸钠) 无水醋酸钠 5.0～ 5.1 55 65mS/cm 缓冲液6 (50 mM 醋酸钠) 无水醋酸钠 5.0～ 5.5 3 5mS/cm 缓冲液7?(?75 mM Sodium Phosphate, 0.2 M NaCL)二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠氯化钠6.5～7.022 ～27mS/cm 缓冲液Tris 20Mm, NaCl 100 mM, pH7.3-7.5 7.3-7.5 10～17 mS/cm 缓冲液Tris 20Mm, NaCl 500 mM, pH7.3-7.5 7.3-7.5 40～60mS/cm 缓冲液mS/cm 缓冲液Sodium citrate dehydrate（柠檬酸钠） 28mM; 5.0-6.0 1.0～5.0mS/cm 缓冲液 Sodium citrate dehydrate 28mM; NaCl 0.2M, 7.0～8.0 20～30mS/cm 缓冲液15（CD20保存液） 150 mM NaCl, 0.07% Tween 80，citrate dehydrate 28mM 标准版： 柠檬酸 0.1g/L 柠檬酸钠 8.1 g/L 氯化钠 8.76 g/L 吐温80 0.6482 g/L 6.0-7.0 15～20mS/cm 溶液2?(20 %乙醇) 95％乙醇 NP 溶液4 (0.1M NaOH) 氯化钠-氢氧化钠 NP 溶液5(20 %乙醇