国科会大专生研究计画 - 国立台东大学.doc

指導教授：邱泰嘉 教授 開發毛細管電泳應用於 蔬果及環境水體的分析 國立臺東大學應用科學系 專題生：徐建華 研究時間：99年7月至100年2月 目錄 一.摘要………………………………………………………3 二.研究動機與研究問題……………………………………3 三.文獻回顧與探討…………………………………………4 (一)毛細管電泳的分離模式……………………………4 (二)毛細管電泳線上濃縮法……………………………4 (三)胺基甲酸.研究方法及步驟…………………………………………5 (一)藥品與溶劑…………………………………………5 (二)儀器介紹……………………………………………5 (三)標準品與緩衝溶液配製……………………………5 (四)實物樣品的應用……………………………………7 (五)毛細管電泳實驗流程………………………………7 五.預期結果…………………………………………………8 六.參考文獻…………………………………………………8 七.需要指導教授指導內容…………………………………10 一.摘要 本研究以毛細管電泳結合紫外可見光吸收偵測器(簡稱CE-UV) 對蔬果與自然界水質中進行分離及檢測的方法，並搭配線上濃縮技術，發展具有高靈敏度、高解析度、速度快、分離時間短、樣品與緩衝溶液用量少等優點的農藥分析技術。目前已廣泛用於生化、醫藥以及環境污染物等分析上。本實驗所選定國內外最常使用的胺基甲酸於緩衝溶液中，基甲酸(HPLC/FL)，但其所需花費的成本較高、時間較長、前處理較複雜，且所需的樣品量較大。因此希望藉由本實驗能應用在蔬果及環境水質偵測上，開發出兼具快速、靈敏度高且成本低廉的毛細管電泳檢測方式，以降低胺基甲酸 關鍵詞: 胺基甲酸 高分子聚合物、毛細管電泳、線上濃縮 二.研究動機與研究問題 2009年初經台北市政府衛生局抽驗南北雜貨藥行所售乾燥菊花食品，農藥殘留，其中台東縣轄黃菊花產製業者所產售之產品計有3件被檢驗農藥殘留與規定不符，以致於造成市面上流通的食用花卉菊花全面滯銷狀態 三.文獻回顧與探討 (一)毛細管電泳的分離模式 近年來，已有許多毛細管電泳檢測殘留農藥的方法被提出，常用的幾種毛細管電泳模式，包括：毛細管區帶電泳(capillary zone electrophoresis, CZE)、微胞電動力毛細管電層析法(micellar electrokinetic chromatography, MEKC)和毛細管電層析法(capillary electrochromatography, CEC)等方法都已廣泛應用於殘留農藥的分析與檢測。Zhang等人則提出免疫毛細管電泳結合雷射誘導螢光法偵測稻米樣品中的加保利(carbaryl) []。此方法偵測加保利的線性範圍界於0.16–50 ng/mL，而偵測極限可達0.05 ng/mL。Rodriguez-Gonzalo等人開發使用巨大分子聚合物(monolithic polymer)塗附的毛細管，並於毛細管內進行微萃取(microextraction)，以微胞電動力毛細管層析法分析基甲酸農藥[3]。在最佳化的條件下，可以在6分鐘內分離13個分析物，並且具有良好的線性範圍、再現性與偵測極限(1-16 (g/L)。(capillary electrophoresis; CE)因為具有高靈敏、分離時間短、樣品與緩衝溶液用量少和高解析度等優點，因此也常用於生物分子的偵測，例如: DNA、蛋白質、胺基酸、胺類、醣類和硫醇分子等[4,5]。樣品線上濃縮法常用於提升毛細管電泳的偵測靈敏度，常用的濃縮機制有以下幾種：(1)場放大樣品堆積法(field-amplified sample stacking)；(2)大體積樣品堆積法(large-volume sample stacking)；(3) pH界面濃縮法(pH-mediated stacking)；(4) 等速電泳法(isotachophoresis)；(5)等點聚焦法(isoelectric focusing)與(6) 微胞掃滾法(sweeping)等，這些方法都已經成功應用於毛細管電泳分離技術中，並且大幅提升靈敏度[6-8]。近年來，Tseng等人成功發展利用聚合物溶液進行樣品線上濃縮與分離各種大小分子[9,10]。 在2000年，Sam F. Y.Li團隊以MEKC搭配螢光偵測器成功分離出10個胺基甲酸氨0.5ppm。[11]。 (三)氨基甲酸基甲酸[12]。當胺基甲酸鹽類被代謝後，其對乙醯膽鹼酵素之作用即消失，則神經傳導系統便恢復正常，不過其引起的毒性作用卻頗為迅速，