大鲵dmrt2 基因cdna 的克隆与表达分析 - 水产学报.pdf

第36 卷第8 期 水 产 学 报 Vol.36, No.8 2012 年8 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Aug., 2012 文章编号: 1000-0615(2012)08-1179-06 DOI:10.3724/SP.J.1231.2012.27941 大鲵 Dmrt2 基因 cDNA 的克隆与表达分析 * 许宝红, 肖真明, 肖调义, 陈开健, 刘巧林, 周 伟, 刘 敏, 姚一彬 (湖南农业大学动物科学技术学院, 湖南 长沙 410128) 摘要: Dmrt2 是参与性腺发育最古老的发育基因家族Dmrt 家族成员之一, 在维持胚胎组织的 正常发育、精子的发生、神经系统和感觉器官发育等方面起重要作用。目前在哺乳动物人 类、鸟类红原鸡以及水生动物青鳉中都克隆到Dmrt 家族成员并证明其与性腺和生长发育的 密切相关性。研究采用RACE 方法克隆了大鲵Dmrt2 基因全长cDNA 序列共2 026 bp, 开放 阅读框长1 581 bp, 5′非编码区长58 bp, 3′非编码区长387 bp, 基因序列提交GenBank 的登录 号为FJ859987 。该基因编码蛋白含526 个氨基酸, 依生物信息学方法预测该氨基酸为非跨 膜蛋白, 无信号肽, 定位在细胞质内, 无分泌蛋白。CDD 数据库分析该 ORF 框翻译的氨基 酸, 在93~146 位含DM 保守结构域(c102557) 的两个成员pfam00751 和smart003010, 与哺乳 类人mab-3、鸟类红原鸡Dmrt2 、两栖类非洲爪蟾Dmrt2 和水生类鲐mab-3 DM 结构域存在 I(异亮氨酸) 、R(精氨酸) 、M( 甲硫氨酸) 、T(苏氨酸) 、C(半胱氨酸)5 个氨基酸的变异; 系统 进化树分析表明：大鲵Dmrt2 与以上四物种首先聚类, 据此推测Dmrt 基因在进化上高度保 守, DM 结构域上5 个氨基酸的变异对蛋白功能的发挥可能无重要影响。实时荧光定量组织 差异表达显示, Dmrt2 基因在大鲵的精巢和肌肉组织中高表达, 预示该基因可能在性腺发育 和生长发育方面起重要作用。 关键词: 大鲵; Dmrt2; 实时荧光定量PCR 中图分类号: Q 785; S 917.4 文献标志码: A Dmrt 基因家族是参与性腺发育的最古老的发 主要表达于体节形成前的中胚层以及正在发育的 育基因家族, 在进化中具有高保守性[1] 。近期研究 体节中[8], Dmrt2a 基因可能指导体节的发生, 而 表明, Dmrt 基因家族不仅和性腺发育相关, 还参与 Dmrt2b 基因对鳃弓的发育具有潜在的作用[9] 。大 胚胎发育过程中的其他功能[2] 。Dmrt2 是 Dmrt 家 鲵 ( Andrias davidianus)属两栖纲、有尾目、隐鳃 族成员之一, 在维持胚胎组织的正常发育和功能 鲵科, 是现存个体最大的两栖动物[10] 。两栖类在生 [3] [4] 方面起重要作用 。Kondo 等 研究表明, Dmrt2 在 物系统进化上是由水生向陆生进化的一个关键环 鳉 青 (Oryzias latipes)成体的精巢中表达, 可能参与 节, 为了深入探讨 Dmrt2 在不同进化地位的动物 了精子的发生。在雌雄尼罗罗非鱼的脑、眼、鳃、 中的功能,